本发明涉及一种用于从血浆中提取免疫球蛋白(ig)的方法和系统，例如免疫球蛋白g(igg)。相关申请本技术要求澳大利亚临时专利申请号2021901577，其整体内容援引加入本文。
背景技术：
1、已大幅增加对纯化蛋白(例如，特定抗体)的需求。此类纯化的蛋白可用于治疗和/或诊断目的。
2、几十年来，已在工业上将人血浆用于生产广泛投入使用和接受的血浆蛋白产品，例如人白蛋白(hsa)、免疫球蛋白(igg)、凝血因子浓缩物(凝血因子viii、凝血因子ix、凝血酶原复合物等)和抑制剂(抗凝血酶、c1抑制剂等)。在此类来源于血浆的药物的开发过程中，已经建立的血浆分馏方法导致中间产物富含某些蛋白组分，然后其作为血浆蛋白产品的起始成分。可以在例如人类蛋白质的分子生物学中回顾典型的过程(schultze h.e.,heremans j.f.；volume i:nature and metabolism of extracellular proteins 1966,elsevier publishing company；p.236-317)。这些分离技术允许从同一血浆供体库生产多种治疗性血浆蛋白产品。与从一个供体库中仅生产一种血浆蛋白产品相比，这在经济上更具优势，因此已采用其作为血液血浆分馏的工业标准。
3、血浆的冷乙醇分馏是这种类型的分馏处理的一个例子，是由e.j cohn和他的团队在第二次世界大战期间率先提出的，主要用于纯化白蛋白(cohn ej,et al.1946,j.am.chem.soc.62:459–475)。cohn分馏处理包括分阶段增加乙醇浓度，从0％至40％，同时将ph从中性(ph 7)降低到约4.8，导致白蛋白的沉淀。虽然在过去70年左右的时间里cohn分馏得到了发展，但大多数商业血浆分馏处理都是基于原始处理或其变体(例如kistler/nitschmann)，利用ph、离子强度、溶剂极性和酒精浓度的差异将血浆分离成一系列主要的沉淀蛋白组分(如cohn中的组分i至v)。
4、已经开发了对cohn分馏处理的修改版以提高多价免疫球蛋白的回收率。例如，oncley和他的同事使用cohn组分ii iii作为起始材料，将不同于cohn所描述的冷乙醇、ph、温度和蛋白浓度的组合，以生产活性免疫球蛋白血清组分(oncley et al.,(1949)j.am.chem.soc.71,541-550)。如今，oncley法是用于生产多价igg的经典方法。然而，已知的是，大约5％的γ-球蛋白(富含抗体的部分)与组分i共沉淀，大约15％的血浆总γ-球蛋白通过组分ii iii步骤丢失。(见表iii,cohn ej,et al.1946,j.am.chem.soc.62:459-475)。kistler/nitschmann法旨在通过降低某些沉淀步骤(沉淀b vs组分iii)的乙醇含量来提高igg的回收率。然而，产量的增加是以纯度为代价的(kistler&nitschmann,(1962)vox sang.7,414-424)。
5、最初，成功地将源于这些分馏处理的免疫球蛋白g(igg)制剂用于预防和处理各种传染病。然而，由于乙醇分馏是一个相对粗糙的过程，因此igg产品含有杂质和聚集体，在某种程度上它们只能肌肉注射。从那时起，纯化过程的另外改进导致了适合静脉注射(称为ivig)和皮下注射(称为scig)的igg制剂。
6、据估计，2010年全球处理了约3000万升血浆，提供了一系列治疗产品，包括约500吨白蛋白和100吨ivig。ivig市场约占整个血浆分馏市场的40-50％(p.robert,worldwidesupply and demand of plasma and plasma derived medicines(2011)j.blood andcancer,3,111-120)。因此，随着对ivig的需求保持强劲(以及对scig的需求不断增加)，仍然需要提高从血浆和相关组分中的免疫球蛋白回收率。优选地，这必须以确保其他血浆来源的治疗性蛋白的回收不会受到不利影响的方式来实现。
7、从商业角度来看，最初的分馏处理对与生产治疗性蛋白(特别是来源于血浆的蛋白)相关的总体生产时间和成本至关重要，因为随后的纯化步骤将取决于这些最初组分中感兴趣的蛋白的产量和纯度。虽然已经为来源于血浆的蛋白开发了冷乙醇分馏处理的不同修改版，以在较低的操作成本下提高蛋白产量，但是较高的蛋白产量通常与较低的纯度相关。
8、需要一种改进的并且符合严格安全标准的方法和系统，用来工业规模生产来源于血液的血浆或血清的蛋白。目前使用的下游技术价格相对较高，并且产量不是最优的。因此，迫切需要开发更高效、更经济的方法，用于从血浆中提取和纯化蛋白(例如免疫球蛋白)。
9、本说明书中对任何现有技术的引用并不是承认或建议该现有技术构成任何司法管辖区的公知常识的一部分，或者本领域的技术人员可以合理地期望该现有技术被理解、视为相关和/或与其他现有技术相结合。
技术实现思路
1、本发明基于以下发现：可以直接从血浆中获得相对纯的免疫球蛋白制剂，特别是igg，而不需要乙醇分馏步骤的发现。
2、进一步，本发明基于以下发现：还可以直接从血浆中获得相对纯净的免疫球蛋白，特别是igg和白蛋白，而不需要乙醇分馏步骤。
3、更进一步，本发明基于以下发现：还可以直接从血浆中获得相对纯的白蛋白制剂，而不需要乙醇分馏步骤。
4、因此，在第一方面，本发明提供用于获得免疫球蛋白溶液的方法，该方法包括：
5、-在使白蛋白能够从样品中选择性沉淀的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，
6、-其中所述条件包括约4.6至约5.0的ph范围；
7、-从而形成免疫球蛋白溶液。
8、优选地，所述条件还包含电导率为约5ms/cm至约12ms/cm之间，优选地，8ms/cm至约12ms/cm。
9、在第二方面，本发明提供一种用于纯化免疫球蛋白的方法，该方法包括：
10、-在包括约4.6至约5.0的ph范围的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
11、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
12、-将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离，以获得纯化免疫球蛋白溶液。
13、优选地，将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括对所述悬浮液进行连续提取过滤。优选地，将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：
14、-将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液。
15、-回收所述第一滤液。
16、所述包含含有不溶蛋白的组分的第一截留物通常富含白蛋白，并且所述包含含有可溶蛋白的组分的第一滤液通常富含免疫球蛋白。
17、在进一步处理之前，可以对富含免疫球蛋白的第一滤液进行浓缩步骤。浓缩步骤可以包括连续浓缩处理，由此将所述第一滤液输送至第二过滤装置，所述第二过滤装置包含横流过滤元件或tff，其适于产生富含免疫球蛋白的第二截留物；以及耗尽免疫球蛋白的第二滤液。任选地，可以将所述耗尽免疫球蛋白的第二滤液流回至第一罐和/或将富含免疫球蛋白的第二截留物流回至第二罐。
18、应当理解，可以使用如本文进一步所描述的标准技术对富含免疫球蛋白的溶液进行进一步纯化。
19、在一个优选的实施方案中，提供一种用于纯化免疫球蛋白的方法，所述方法包括：
20、-在包括约4.6至约5.0的ph范围，和电导率为约8ms/cm至约12ms/cm的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
21、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
22、-将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离，以获得纯化免疫球蛋白溶液。
23、-其中任选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液并回收第一滤液。
24、如果需要进一步调节ph，可以直接调节来源于血液的血浆样品的ph，而不实质性稀释所述样品，例如通过添加浓酸(例如乙酸)或酸和碱的组合(例如，naoh)。类似地，可以直接调节来源于血液的血浆的电导率，不实质性稀释所述样品。
25、在第三方面，一种用于从血浆中纯化免疫球蛋白的方法，所述方法包括：
26、a)在第一罐中：在包括约4.6至约5.0的ph范围，并且任选地，电导率为约8ms/cm至约12ms/cm之间的条件下，将来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸混合，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，从而形成悬浮液，所述悬浮液包含可溶免疫球蛋白和不溶白蛋白；
27、b)将所述悬浮液输送至包含动态过滤元件的第一过滤装置，所述动态过滤元件适于产生包含所述不溶白蛋白的第一截留物和包含所述可溶免疫球蛋白第一滤液；
28、c)任选地，通过将所述第一截留物流至第一罐，在第一罐中稀释所述悬浮液；
29、d)在第二罐中回收所述第一滤液，以及
30、e)任选浓缩所述第一滤液。
31、因此，在第四方面，本发明提供一种用于获得免疫球蛋白溶液和白蛋白沉淀物的方法，所述方法包括：
32、-在使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，
33、-其中所述条件包括约4.2至约5.0的ph范围；
34、-从而形成免疫球蛋白溶液和白蛋白沉淀物。
35、优选地，所述条件还包含电导率为约5ms/cm至约12ms/cm，优选8ms/cm至约12ms/cm。更优选地，如果来源于血液的血浆被稀释，则电导率等于或大于5ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。如果来源于血液的血浆没有被稀释，则电导率等于或大于8ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。
36、在第五方面，本发明提供一种用于纯化免疫球蛋白和白蛋白的方法，所述方法包括：
37、-在包括约4.2至约5.0的ph范围的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
38、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
39、-将所述含有可溶蛋白的组分与所述含有不溶蛋白的组分分离，以获得纯化免疫球蛋白溶液和包含白蛋白的悬浮液。
40、优选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括对所述悬浮液进行连续提取过滤。优选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：
41、-将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液；
42、-回收所述第一滤液和第一截留物。
43、所述包含含有不溶蛋白的组分的第一截留物通常富含白蛋白，并且所述包含含有可溶蛋白的组分的第一滤液通常富含免疫球蛋白。
44、在进一步处理之前，可以对富含免疫球蛋白的第一滤液进行浓缩步骤。浓缩步骤可以包括连续浓缩处理，由此将所述第一滤液流至第二过滤装置，所述第二过滤装置包含横流过滤元件或tff，其适于产生富含免疫球蛋白的第二截留物；以及耗尽免疫球蛋白的第二滤液。任选地，可以将所述耗尽免疫球蛋白的第二滤液流回至第一罐和/或将富含免疫球蛋白的第二截留物流回至第二罐。
45、应当理解，可以使用如本文进一步所描述的标准技术对富含免疫球蛋白的溶液进行进一步纯化。
46、在一个优选的实施方案中，提供一种用于纯化免疫球蛋白和白蛋白的方法，所述方法包括：
47、-在包括约4.2至约5.0的ph范围的条件下，并且电导率为约8ms/cm至约12ms/cm，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
48、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
49、-将所述含有可溶蛋白的组分与所述含有不溶蛋白的组分分离，以获得纯化免疫球蛋白溶液和包含白蛋白的悬浮液；
50、-其中任选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液，并回收第一滤液。
51、如果需要进一步调节ph，可以直接调节来源于血液的血浆样品的ph，而不实质性稀释所述样品，例如通过添加浓酸(例如乙酸)或酸和碱的组合(例如，naoh)。类似地，可以直接调节来源于血液的血浆的电导率，不实质性稀释所述样品。
52、在第六方面，提供一种用于从血浆中纯化免疫球蛋白和白蛋白的方法，所述方法包括：
53、a)在第一罐中：在包括约4.2至约5.0的ph范围，并任选地，电导率为约8ms/cm至约12ms/cm之间的条件下，将来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸混合，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，从而形成包含可溶免疫球蛋白和不溶白蛋白的悬浮液；
54、b)将所述悬浮液输送至第一过滤装置，所述第一过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生包含所述不溶白蛋白的第一截留物和包含所述可溶免疫球蛋白的第一滤液；
55、c)任选地，通过将所述截留物流至第一罐，在第一罐中稀释所述悬浮液；
56、d)在第二罐中回收所述第一滤液，以及
57、e)任选浓缩第一滤液。
58、因此，在第七方面，本发明提供一种用于获得白蛋白沉淀物的方法，所述方法包括：
59、-在使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，
60、-其中所述条件包括约4.15至约4.25的ph范围；
61、-从而获得白蛋白沉淀物。
62、优选地，所述条件还包含电导率为约5ms/cm至约12ms/cm，优选8ms/cm至约12ms/cm。更优选地，如果来源于血液的血浆被稀释，则电导率等于或大于5ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。如果来源于血液的血浆没有被稀释，则电导率等于或大于8ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。
63、在第八方面，本发明提供一种用于纯化白蛋白的方法，所述方法包括：
64、-在包括约4.15至约4.25的ph范围的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
65、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
66、-将所述含有可溶蛋白的组分与所述含有不溶蛋白的组分分离，以获得包含白蛋白的沉淀物或悬浮液。
67、优选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括对悬浮液进行连续提取过滤。优选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：
68、-将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液；
69、-回收第一截留物。
70、所述包含含有不溶蛋白的组分的第一截留物通常富含白蛋白，并且所述包含含有可溶蛋白的组分的第一滤液通常富含免疫球蛋白。
71、应当理解，可以使用如本文进一步所描述的标准技术对富含免疫球蛋白的溶液进行进一步纯化。
72、在一个优选的实施方案中，提供一种用于纯化白蛋白的方法，所述方法包括：
73、-在包括约4.15至约4.25的ph范围并且电导率为约8ms/cm至约12ms/cm的条件下，使来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸接触，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，
74、-从而形成包含含有可溶蛋白的组分和含有不溶蛋白的组分的悬浮液，所述含有可溶蛋白的组分包含免疫球蛋白，所述含有不溶蛋白的组分包含白蛋白；
75、-将所述含有可溶蛋白的组分与所述含有不溶蛋白的组分分离，以获得包含白蛋白的悬浮液；
76、-其中任选地，所述将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离的步骤包括：将所述悬浮液输送至过滤装置，所述过滤装置包含动态过滤元件，所述动态过滤元件适于产生第一截留物和第一滤液并回收第一截留物。
77、如果需要进一步调节ph，可以直接调节来源于血液的血浆样品的ph，而不实质性稀释所述样品，例如通过添加浓酸(例如乙酸)或酸和碱的组合(例如，naoh)。类似地，可以直接调节来源于血液的血浆的电导率，不实质性稀释所述样品。
78、在第九方面，本发明提供一种用于从血浆中纯化免疫球蛋白和白蛋白的方法，所述方法包括：
79、a)在第一罐中：在包括约4.2至约5.0的ph范围，并任选地，电导率为约8ms/cm至约12ms/cm之间的条件下，将来源于血液的血浆样品与中链脂肪酸混合，以使白蛋白能够从所述样品中选择性沉淀，从而形成包含可溶免疫球蛋白和不溶白蛋白的悬浮液；
80、b)将所述悬浮液输送至包含动态过滤元件的第一过滤装置，所述动态过滤元件适于产生包含所述不溶白蛋白的第一截留物和包含所述可溶免疫球蛋白第一滤液；
81、c)任选地，通过将所述第一截留物流至第一罐，在第一罐中稀释所述悬浮液；
82、d)回收第一截留物。
83、在任何方面，第一罐中的剩余悬浮液或第一截留物含有与中链脂肪酸复合的不溶白蛋白。可以将剩余悬浮液或第一截留物的ph调整至6.4-6.7，优选6.8-7.2，以破坏白蛋白与中链脂肪酸的结合。在一个实施方案中，可以用1m氢氧化钠调整ph。任选地，然后对第一截留物进行混合，直到溶解的白蛋白的ph稳定(一般约30-60分钟)。然后可以将溶液输送至进一步过滤装置(例如包括进一步过滤装置的第二系统，例如，如图16所示相当于5的进一步过滤装置)以产生耗尽白蛋白的截留物和富含白蛋白的滤液，所述进一步过滤装置包含动态过滤元件。
84、在一个实施方案中，然后将富含白蛋白的滤液连续浓缩至，或约20-45g/l蛋白，以形成浓缩的白蛋白溶液(例如，第二系统包括进一步过滤装置，例如，如图16所示相当于8的进一步过滤装置)，优选使用tff膜。
85、将浓缩的白蛋白的溶液在60至65℃的范围内加热，一般加热时间超过90分钟。不受任何理论约束，据信除了白蛋白以外的各种蛋白在此阶段变性。
86、加热浓缩的白蛋白溶液后，一般用1m盐酸将溶液的ph调节至，或约4.20。同时，可以将浓缩的白蛋白溶液冷却至4℃，由此在上述加热步骤期间变性的蛋白形成沉淀。然后可以通过过滤去除沉淀物，由此滤液包含纯化的白蛋白(一般，白蛋白纯度等于或大于95％、96％、97％或98％总蛋白，并且白蛋白产量等于或大于85％、86％、87％、88％、89％或90％)。
87、在本发明的任何方面，第一过滤装置中的动态过滤元件是动态横流过滤元件，所述动态过滤元件适于产生富含可溶性蛋白质(免疫球蛋白)的滤液(渗透液)。
88、在本发明的任何方面，第二过滤装置中的动态过滤元件是动态横流过滤元件，所述动态过滤元件适于产生富含免疫球蛋白的截留物。
89、在本发明的任何方面，进一步过滤装置中的动态过滤元件是动态横流过滤元件，所述动态过滤元件适于产生富含白蛋白的滤液。
90、在一个优选的实施方案中，动态横流过滤元件是旋转横流过滤元件。更优选地，旋转横流过滤元件包含过滤盘。过滤盘通常安装在轴构件上。在一个实施方案中，旋转横流过滤元件包含至少一个过滤盘和至少一个轴构件。
91、根据本发明任何方面的优选实施方案，过滤盘膜是陶瓷膜。更优选地，陶瓷膜具有大于或等于5nm至小于或等于2μm的孔径范围。在具体实施方案中，陶瓷膜具有从约0.2μm至2μm的孔径。在具体实施方案中，陶瓷过滤膜具有大于或等于5nm至小于或等于200nm(0.2μm)的平均孔径范围。在具体实施方案中，陶瓷过滤膜具有大于或等于50nm至小于或等于100nm的平均孔径范围。此类过滤盘由kerafol和flowserve提供。
92、应当理解，来源于血液的血浆样品可以包括源于血液的任何血浆样品，优选为人血。在某些实施方案中，来源于血液的血浆样品包括新鲜血浆、贫冷凝蛋白(cryo-poor)血浆或富冷凝蛋白(cryo-rich)血浆。可以从多个捐献和/或受试者中获得血浆，并汇集在一起。血浆可以是超免疫性血浆。
93、优选地，血浆样品不包含助滤剂和/或没有经过乙醇或者其他分馏处理。
94、在第一、第二或第三方面中的任何方面中，在与中链脂肪酸接触和/或混合之前，将血浆样品的ph调整至约4.6至约5.0的ph范围。例如，可以将血浆样品的ph调整至约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5.0。可以将血浆样品的ph调整至ph 4.6、ph 4.7、ph 4.8、ph 4.9或ph 5.0。
95、在第四、第五或第六方面中的任何方面中，在与中链脂肪酸接触和/或混合之前，将血浆样品的ph调整至约4.2至约5.0的ph范围。例如，可以将血浆样品的ph调整至约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9或约5.0。可以将血浆样品的ph调整至ph4.2、ph 4.3、ph 4.4、ph 4.5、ph 4.6、ph 4.7、ph 4.8、ph 4.9或ph5.0。
96、在第七、第八或第九方面中的任何方面中，在与中链脂肪酸接触和/或混合之前，将血浆样品的ph调整至约4.15至约4.25的ph范围。例如，可以将血浆样品的ph调整至约4.15、约4.16、约4.17、约4.18、约4.19。约4.20、约4.21、约4.22、约4.23、约4.24或约4.25。可以将血浆样品的ph调整至ph为4.15、ph为4.16、ph为4.17、ph为4.18、ph为4.19、ph为4.20、ph为4.21、ph为4.22、ph为4.23、ph为4.24或ph为4.25。
97、在任何方面，在与中链脂肪酸接触之前调节血浆样品的ph，而不实质性稀释样品。如果需要进一步调节ph，可以通过添加浓酸(例如乙酸)或酸和碱的组合(例如，naoh)来完成这类ph调节。
98、如果需要，调整所得溶液的电导率以达到预期的电导率，预期的电导率为约8ms/cm至约12ms/cm。
99、在本发明任何方面的某些实施方案中，在与中链脂肪酸混合的步骤之前，在缓冲液中稀释血浆样品。血浆稀释的稀释度可以为约1:0.5、约1:0.75、约1:1、约1:1.25、约1:1.5、约1:1.75或约1:2。在血浆稀释被稀释的情况下，电导率可以为约5ms/cm至约12ms/cm。
100、稀释血浆的缓冲液可以是任何适用于稀释血浆的缓冲液，例如，醋酸盐缓冲液(例如，醋酸钠)。醋酸盐缓冲液可以包含三水醋酸钠和冰乙酸。缓冲液的浓度可以是60mm、80mm、100mm或0.22m，并且可以具有为或约4.1、为或约4.2、为或约4.3、为或约4.4、为或约4.5、为或约4.6、为或约4.7、为或约4.8的ph。或者，可以使用磷酸-醋酸盐缓冲液。磷酸-醋酸盐缓冲液可以包含10mm磷酸盐(例如，磷酸钠)和10mm醋酸盐(例如，醋酸钠)。该缓冲液的ph可以为约4.3至4.4。如果需要调整所得溶液的电导率至预期的电导率，可以通过例如添加更浓缩的醋酸盐缓冲液(例如，3.5m醋酸盐缓冲液，包括三水醋酸钠和冰乙酸，ph 5)，预期的电导率为约5至约12ms/cm，优选约8至约12ms/cm。
101、通常，不仅用缓冲液来稀释血浆，还用来促进血浆样品的ph调节。因此，在本发明的第一、第二或第三方面的任何实施方案中，稀释血浆样品的ph为约4.6至约5.0的ph。例如，稀释血浆样品的ph可以是约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5.0的ph。稀释血浆样品的ph可以为ph 4.6、ph 4.7、ph 4.8、ph 4.9或ph 5.0。因此，在本发明的第四、第五或第六方面的任何实施方案中，稀释血浆样品的ph为约4.2至约5.0的ph。例如，稀释血浆样品的ph可以为约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9或约5.0的ph。稀释血浆样品的ph可以为ph 4.2、ph 4.3、ph 4.4、ph 4.5、ph4.6、ph 4.7、ph 4.8、ph 4.9或ph 5.0。因此，在本发明的第七、第八或第九方面的任何实施方案中，稀释血浆样品的ph为约4.15至约4.25的ph。例如，稀释血浆样品的ph可以为约4.15、约4.16、约4.17、约4.18、约4.19、约4.20、约4.21、约4.22、约4.23、约4.24或约4.25的ph。稀释血浆样品的ph可以为ph 4.15、ph 4.16、ph 4.17、ph 4.18、ph 4.19、ph 4.20、ph 4.21、ph 4.22、ph 4.23、ph 4.24或ph 4.25。
102、在任何方面，或实施方案，条件可以包含电导率为约5ms/cm至约12ms/cm，优选8ms/cm至约12ms/cm。更优选地，如果来源于血液的血浆被稀释，则电导率等于或大于5ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。如果来源于血液的血浆没有被稀释，则电导率等于或大于8ms/cm，但小于或小于约12ms/cm。
103、例如，稀释或未稀释的血浆样品的电导率为约8至约12ms/cm。因此，在任何实施方案中，稀释或未稀释的血浆样品的电导率为约8ms/cm、约9ms/cm、约10ms/cm、约11ms/cm或约12ms/cm。在任何实施方案中，稀释或未稀释的血浆样品的电导率为8ms/cm、9ms/cm、10ms/cm、11ms/cm或12ms/cm。在任何实施方案中，稀释血浆的电导率等于或大于5ms/cm、6ms/cm或7ms/cm。一般在室温下测量电导率，优选在18至25℃之间测量电导率。
104、在任何实施方案中，所述中链脂肪酸可以选自包含ch3(ch2)ncooh结构通式的脂肪酸，其中所述脂肪酸是c4至c10羧酸。脂肪酸可以是饱和的，也可以是不饱和的。更优选地，脂肪酸包含庚酸(enanthic(heptanoic)acid)、辛酸(caprylic(octanoic)acid)、辛烯酸(octenoic acid)、壬酸(pelargonic(nonanoic)acid)、壬烯酸(nonenoic acid)或癸酸(capric(decanoic)acid)。最优选地，脂肪酸是辛酸。还考虑将本文描述的任何脂肪酸的盐或酯(例如辛酸盐)作为反应物。
105、在第一、第二或第三方面的任何实施方案中，与血浆样品混合的脂肪酸的量为约0.30g/g总蛋白(在血浆样品中)、约0.35g/g总蛋白、约0.40g/g总蛋白、约0.45g/g总蛋白或约0.50g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，脂肪酸的量为约0.300g/g总蛋白、或约0.325g/g总蛋白、或约0.350g/g总蛋白、或约0.375g/g总蛋白、或约0.400g/g总蛋白、或约0.425g/g总蛋白、或约0.450g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。更优选地，脂肪酸的量为至少约0.350g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，脂肪酸的量为从约0.38g/g总蛋白至约0.50g/g总蛋白的范围，优选地，脂肪酸为辛酸。更优选地，脂肪酸的量为约0.38g/g总蛋白、约0.39g/g总蛋白、约0.40g/g总蛋白、约0.41g/g总蛋白、约0.42g/g总蛋白、约0.43g/g总蛋白、约0.44g/g总蛋白、约0.45g/g总蛋白、约0.46g/g总蛋白、约0.47g/g总蛋白、约0.48g/g总蛋白、约0.49g/g总蛋白或约0.50g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。
106、在第一、第二或第三方面的任何实施方案中脂肪酸的量为0.30g/g总蛋白(在血浆样品中)、0.35g/g总蛋白、0.40g/g总蛋白、0.45g/g总蛋白或0.50g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，脂肪酸的量为0.300g/g总蛋白、或0.325g/g总蛋白、或0.350g/g总蛋白、或0.375g/g总蛋白、或0.400g/g总蛋白、或0.425g/g总蛋白、或0.450g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。更优选地，脂肪酸的量为至少0.350g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，脂肪酸的量为从0.38g/g总蛋白至0.50g/g总蛋白的范围，优选地，脂肪酸为辛酸。更优选地脂肪酸的量为0.38g/g总蛋白、0.39g/g总蛋白、0.40g/g总蛋白、0.41g/g总蛋白、0.42g/g总蛋白、0.43g/g总蛋白、0.44g/g总蛋白、0.45g/g总蛋白、0.46g/g总蛋白、0.47g/g总蛋白、0.48g/g总蛋白、0.49g/g总蛋白或0.50g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。
107、在第四、第五或第六方面的任何实施方案中，与血浆样品混合的脂肪酸的量为约0.35g/g总蛋白(在血浆样品中)、约0.40g/g总蛋白、约0.45g/g总蛋白、约0.50g/g总蛋白或约0.55g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，脂肪酸的量为约0.35g/g总蛋白、约0.36g/g总蛋白、0.37g/g总蛋白、0.38g/g总蛋白、约0.39g/g总蛋白、约0.40g/g总蛋白、约0.41g/g总蛋白、约0.42g/g总蛋白、约0.43g/g总蛋白、约0.44g/g总蛋白、约0.45g/g总蛋白、约0.46g/g总蛋白、约0.47g/g总蛋白、约0.48g/g总蛋白、约0.49g/g总蛋白、约0.50g/g总蛋白、约0.51g/g总蛋白、约0.52g/g总蛋白、约0.53g/g总蛋白、约0.54g/g总蛋白或约0.55g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。
108、在第四、第五或第六方面的任何实施方案中，与血浆样品混合的脂肪酸的量为0.36g/g/总蛋白、0.37g/g总蛋白、0.38g/g总蛋白、0.39g/g总蛋白、0.40g/g总蛋白、0.41g/g总蛋白、0.42g/g总蛋白、0.43g/g总蛋白、0.44g/g总蛋白、0.45g/g总蛋白、0.46g/g总蛋白、0.47g/g总蛋白、0.48g/g总蛋白、0.49g/g总蛋白、0.50g/g总蛋白、0.51g/g总蛋白、0.52g/g总蛋白、0.53g/g总蛋白、0.54g/g总蛋白或0.55g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。
109、在第七、第八或第九方面的任何实施方案中，与血浆样品混合的脂肪酸的量为等于或大于约0.35g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。优选地，与血浆样品混合的脂肪酸的量为等于或大于约0.35g/g总蛋白，但小于或小于约1.1g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。与血浆样品混合的脂肪酸的量可以为约0.35g/g总蛋白、约0.36g/g总蛋白、约0.37g/g总蛋白、约0.38g/g总蛋白、约0.39g/g总蛋白、约0.40g/g总蛋白、约0.41g/g总蛋白、约0.42g/g总蛋白、约0.43g/g总蛋白、约0.44g/g总蛋白、约0.45g/g总蛋白、约0.46g/g总蛋白、约0.47g/g总蛋白、约0.48g/g总蛋白、约0.49g/g总蛋白、约0.50g/g总蛋白、约0.51g/g总蛋白、约0.52g/g总蛋白、约0.53g/g总蛋白、约0.54g/g总蛋白、约0.55g/g总蛋白、约0.56g/g总蛋白、约0.57g/g总蛋白、约0.58g/g总蛋白、约0.59g/g总蛋白、约0.60g/g总蛋白、约0.61g/g总蛋白、约0.62g/g总蛋白、约0.63g/g总蛋白、约0.64g/g总蛋白、约0.65g/g总蛋白、约0.66g/g总蛋白、约0.67g/g总蛋白、约0.68g/g总蛋白、约0.69g/g总蛋白、约0.70g/g总蛋白、约0.71g/g总蛋白、约0.72g/g总蛋白、约0.73g/g总蛋白、约0.74g/g总蛋白、约0.75g/g总蛋白、约0.76g/g总蛋白、约0.77g/g总蛋白、约0.78g/g总蛋白、约0.79g/g总蛋白、约0.80g/g总蛋白、约0.81g/g总蛋白、约0.82g/g总蛋白、约0.83g/g总蛋白、约0.84g/g总蛋白、约0.85g/g总蛋白、约0.86g/g总蛋白、约0.87g/g总蛋白、约0.88g/g总蛋白、约0.89g/g总蛋白、约0.90g/g总蛋白、约0.91g/g总蛋白、约0.92g/g总蛋白、约0.93g/g总蛋白、约0.94g/g总蛋白、约0.95g/g总蛋白、约0.96g/g总蛋白、约0.97g/g总蛋白、约0.98g/g总蛋白、约0.99g/g总蛋白、约1.0g/g总蛋白、约1.01g/g总蛋白、约1.02g/g总蛋白、约1.03g/g总蛋白、约1.04g/g总蛋白、约1.05g/g总蛋白、约1.06g/g总蛋白、约1.07g/g总蛋白、约1.08g/g总蛋白、约1.09g/g总蛋白或1.1g/g总蛋白，优选地，脂肪酸为辛酸。
110、在第四、第五或第六方面的任何实施方案中，与血浆样品混合的脂肪酸的量为0.35g/g总蛋白、0.36g/g总蛋白、0.37g/g总蛋白、0.38g/g总蛋白、0.39g/g总蛋白、0.40g/g总蛋白、0.41g/g总蛋白、0.42g/g总蛋白、0.43g/g总蛋白、0.44g/g总蛋白、0.45g/g总蛋白、0.46g/g总蛋白、0.47g/g总蛋白、0.48g/g总蛋白、0.49g/g总蛋白、0.50g/g总蛋白、0.51g/g总蛋白、0.52g/g总蛋白、0.53g/g总蛋白、0.54g/g总蛋白、0.55g/g总蛋白、0.56g/g总蛋白、0.57g/g总蛋白、0.58g/g总蛋白、0.59g/g总蛋白、0.60g/g总蛋白、0.61g/g总蛋白、0.62g/g总蛋白、0.63g/g总蛋白、0.64g/g总蛋白、0.65g/g总蛋白、0.66g/g总蛋白、0.67g/g总蛋白、0.68g/g总蛋白、0.69g/g总蛋白、0.70g/g总蛋白、0.71g/g总蛋白、0.72g/g总蛋白、0.73g/g总蛋白、0.74g/g总蛋白、0.75g/g总蛋白、0.76g/g总蛋白、0.77g/g总蛋白、0.78g/g总蛋白、0.79g/g总蛋白、0.80g/g总蛋白、0.81g/g总蛋白、0.82g/g总蛋白、0.83g/g总蛋白、0.84g/g总蛋白、0.85g/g总蛋白、0.86g/g总蛋白、0.87g/g总蛋白、0.88g/g总蛋白、0.89g/g总蛋白、0.90g/g总蛋白、0.91g/g总蛋白、0.92g/g总蛋白、0.93g/g总蛋白、0.94g/g总蛋白、0.95g/g总蛋白、0.96g/g总蛋白、0.97g/g总蛋白、0.98g/g总蛋白、0.99g/g总蛋白、1.0g/g总蛋白、1.01g/g总蛋白、1.02g/g总蛋白、1.03g/g总蛋白、1.04g/g总蛋白、1.05g/g总蛋白、1.06g/g总蛋白、1.07g/g总蛋白、1.08g/g总蛋白、1.09g/g总蛋白或1.1g/g总蛋白，优选地，所述脂肪酸为辛酸。
111、在优选实施方案中，使血浆样品与中链脂肪酸接触的步骤包括：将血浆样品与脂肪酸混合以获得中链脂肪酸和血浆样品均质乳液。在优选实施方案中，混合是剧烈混合，以使得形成均质乳液。
112、优选地，血浆样品与中链脂肪酸混合至少约10分钟、至少约15分钟、至少约20分钟、至少约25分钟、至少约30分钟、至少约35分钟、至少约40分钟、至少约45分钟、至少约50分钟或者更多的时间段，优选地，中链脂肪酸为辛酸。
113、优选地，在将含有可溶蛋白的组分(可溶免疫球蛋白)与含有不溶蛋白的组分(不溶白蛋白)分离的步骤之前，混合步骤之后接着孵育一段时间。优选地，孵育至少约20分钟、至少约30分钟、至少约40分钟、至少约50分钟、至少约60分钟、至少约70分钟、至少约80分钟、至少约90分钟、至少约100分钟、至少约110分钟、至少约120分钟、至少约130分钟、至少约140分钟、至少约150分钟或更多的时间段。
114、在本发明任何方面的任何实施方案中，除非另有说明，该方法的步骤在约18℃至约37℃的温度下进行，优选在约18℃至约24℃之间。在任何实施方案中，温度为约18℃、约19℃、约20℃、约21℃、约22℃、约23℃或约24℃。在任何实施方案中，温度为18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃或24℃。
115、根据本发明的任何方面纯化的免疫球蛋白，优选地包含免疫球蛋白g(igg)，优选地，免疫球蛋白g为人免疫球蛋白g(igg)。免疫球蛋白可以包括igg亚类igg1、igg2、igg3或igg4中的任何一种，优选地，其中igg亚类的相对分布与通常在血浆中观察到的igg亚类的分布相似或基本相同。任选地，存在于组合物中的igg1占总免疫球蛋白的约60％至约70％，igg2以总免疫球蛋白的约25％至约35％存在，igg3以总免疫球蛋白的约2％至约3％存在，以及igg4以总免疫球蛋白的约0.5％至约1.5％存在。
116、在本发明任何方面的任何实施方案中，对免疫球蛋白溶液或浓缩免疫球蛋白进行进一步处理，以进一步纯化免疫球蛋白。优选地，进一步处理不包括连续过滤提取的进一步步骤。
117、在某些实施方案中，对免疫球蛋白进行进一步处理，从而将能够施用最终产品(例如向人体施用)，所述进一步处理例如低ph处理、层析步骤(包括阴离子交换层析和/或免疫亲和层析)、病毒过滤和失活步骤、浓缩和配制。最终产品可用于治疗免疫疾病，特别是自身免疫性疾病和某些神经疾病。这些疾病包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、抗磷脂综合征、免疫性血小板减少症(itp)、川崎病、格林-巴利综合征(gbs)、多发性硬化症(ms)、慢性炎性脱髓鞘多神经病(cidp)、多灶性运动神经病(mmn)、重症肌无力(mg)、皮肤起泡疾病、硬皮病、皮肌炎、多发性肌炎、阿尔茨海默病、帕金森氏病、与唐氏综合征相关的阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、路易体痴呆、额叶变性或血管性痴呆。此外，end ivig和scig产品还可以用于其他医疗程序，如细胞和器官移植。
118、在本发明任何方面的任何实施方案中，纯化免疫球蛋白溶液含有以下杂质中的一种或多种：iga、igm、白蛋白、α-2巨球蛋白、α-1抗胰蛋白酶、脂质和脂蛋白。
119、在任何方面中，在将含有可溶蛋白的组分与含有不溶蛋白的组分分离之后(即，由于使血浆样品与中链脂肪酸接触而获得)，保留悬浮液的含有不溶蛋白的组分。
120、应当理解，然后可以将含有不溶蛋白的组分用于获得纯化白蛋白组分的目的，例如如本文所描述。
121、例如，在本发明第三、第六或第九方面的情况下，一旦将从混合的血浆和中链脂肪酸中获得的悬浮液输送通过第一过滤装置，可以进一步处理任何剩余的悬浮液、和/或第一截留物以获得纯化白蛋白。
122、因此，在本发明的任何方面，所述方法进一步包括：
123、a)将包含白蛋白的含有不溶蛋白的组分的ph调整至约6.4至约7.2之间(优选约6.8至约7.2)的ph，以获得溶解的白蛋白；
124、b)任选地，对溶解的白蛋白进行进一步处理步骤以从中移除杂质；
125、c)从溶解的白蛋白中回收纯化白蛋白。
126、在本发明第三、第六或第九方面的情况下，不溶白蛋白可以是留在第一罐中的剩余不溶蛋白和/或可以进一步包含第一截留物。
127、可以直接调节含有不溶蛋白的组分的ph，而不实质性稀释样品。如果需要进一步调节ph，可以通过添加浓酸(例如乙酸)或酸和碱的组合(例如，naoh)来完成这类ph调节。例如，可以用1m氢氧化钠或磷酸盐缓冲液(ph 7.1-7.4)将含有不溶蛋白的组分(例如第一罐中的残留悬浮液)的ph调节至6.4至7.2(优选6.8至7.2)。还考虑了氢氧化钠和0.12m磷酸盐缓冲液的组合。如果需要，调整所得溶液的电导率以达到预期的电导率，预期的电导率为约8ms/cm至约15ms/cm。
128、任选地，调整含有不溶蛋白的组分的ph包括：首先使所述含有不溶蛋白的组分(不溶白蛋白)与缓冲液接触以形成进一步悬浮液，缓冲液具有7.1至7.4之间的ph，和任选地约8至约15ms/cm之间的电导率，并且调整该进一步悬浮液的ph为至少约6.4的ph，从而获得溶解的白蛋白，优选地，ph为中性ph，更优选地，ph为约6.4至约7.2、或约6.4至约6.7、或约6.8至约7.2之间。
129、任何能够破坏白蛋白和中链脂肪酸之间的结合以便从白蛋白中释放脂肪酸从而溶解白蛋白的缓冲液都适用于该步骤。例如，缓冲液可以具有ph约为7和电导率约为8至约15ms/cm。可以通过将缓冲液添加至含有悬浮液的罐中并搅拌(例如5分钟)直至ph变为约7、优选为约7.2(特别是至少约6.4、更优选约6.4至约6.7、约6.4至约7.2、最优选约6.8至约7.2)来进行该步骤。合适的缓冲液的实例是磷酸盐缓冲液。磷酸盐缓冲液可以包含nah2po4.2h2o和nah2po4.12h2o。缓冲液的浓度可以为0.12m，ph7.3±0.2。或者，如上所述，可以直接使用碱(例如naoh)进行ph调节。
130、对溶解的白蛋白进行进一步处理步骤以移除杂质。
131、在本发明任何方面的一个实施方案中，进一步处理溶解的白蛋白包括：
132、-将溶解的白蛋白输送至过滤装置，过滤装置包含动态过滤元件，动态过滤元件适于产生耗尽白蛋白的截留物和富含可溶白蛋白的滤液；
133、-回收富含白蛋白的滤液。
134、任选地，可以在进一步处理之前，对富含白蛋白的滤液进行浓缩步骤。浓缩步骤可以包括连续浓缩处理，由此将滤液流至第二过滤装置，第二过滤装置包含横流过滤元件，横流过滤元件适于产生富含白蛋白的截留物以及耗尽白蛋白的滤液。
135、因此，根据本发明的实施方案，用于进一步处理溶解的白蛋白的方法可以包括：
136、d)在第一罐中提供溶解的白蛋白：
137、e)将所述溶解的白蛋白溶液输送至第一过滤装置，第一过滤装置包含动态过滤元件，动态过滤元件适于产生耗尽白蛋白的截留物和富含可溶白蛋白的滤液；
138、f)任选地通过将截留物流至第一罐，在第一罐中稀释所述溶液；
139、g)在第二罐中回收富含白蛋白滤液，以及
140、h)任选地浓缩滤液。
141、在任何实施方案中，浓缩滤液的步骤h)包括在第二过滤装置中对滤液进行连续浓缩处理，第二过滤装置包含动态过滤元件或tff，其适于产生富含白蛋白的截留物和耗尽白蛋白的滤液。任选地，将耗尽白蛋白的滤液流回至第一罐和/或将富含白蛋白的截留物流回至第二罐。
142、优选地，第一过滤装置中的动态过滤元件是动态横流过滤元件，动态过滤元件适于产生富含白蛋白的滤液(渗透液)。优选地，第二过滤装置中的动态过滤元件是动态横流过滤元件或tff，动态过滤元件适于浓缩白蛋白溶液，并产生富含白蛋白的截留物。
143、在可选的实施方案中，可以对溶解的白蛋白组分进行本领域公知的醇沉淀法和/或色谱法，以进一步纯化白蛋白。根据白蛋白中存在的污染物的性质，可以采用各种纯化方案。例如，可以对白蛋白进行公知的分馏处理，例如乙醇分馏以产生上清液i、上清液ii iii、上清液-iv-1、上清液-iv-4或组分v。可以按照alburx生产流程对白蛋白进行进一步ph调节、超滤/透析和巴氏灭菌。用于生产纯化白蛋白的其他方法是公知的，并且如在albulex生产流程指导的，包括对白蛋白进行离子交换层析，然后进行凝胶过滤层析和巴氏灭菌。合适的白蛋白纯化工艺讨论于matejtschuk,p.et al(2000)british journal ofanaesthesia 85(6)；887-95，以及于australian public assessment report foralbumin(human)(2017)therapeutic goods administration,pages 8-9(可在线获取：https://www.tga.gov.au/sites/default/files/auspar-albumin-human-170502.pdf)。
144、如本文所用，除非上下文另有要求，否则术语“包含”和该术语的变体(例如“含有”、“包括”)并不旨在排除进一步的添加剂、组分、整数或步骤。
145、在由实施例并参考附图给出的说明书下，本发明进一步的方面以及在前述段落中描述的方面的进一步的实施方案将变得显而易见。