cd38嵌合共刺激受体及其用途的制作方法-k8凯发

本公开的主题提供了靶向cd38(cd38 ccr)的嵌合共刺激受体(ccr)的用途，例如用于减少和/或防止cd38的表达，以及减少和/或防止自然杀伤(nk)细胞损耗。还提供了包含cd38 ccr和抗原识别受体(例如，嵌合抗原受体、t细胞受体(tcr)或tcr样融合分子)的细胞，包含所述细胞的组合物，以及所述细胞或组合物用于治疗和/或预防肿瘤和/或病原体感染的用途。

背景技术：

1、基于细胞的免疫疗法是一种对癌症治疗具有治愈潜力的疗法。可通过引入编码抗原识别受体(如嵌合抗原受体(car)或tcr样融合分子)的遗传物质，来对t细胞和其他免疫细胞进行修饰以靶向肿瘤抗原。患者工程化的car t细胞对一系列液体和实体恶性肿瘤显示出显著的效力。然而，大部分患者出现治疗失败和复发。因此，仍然需要改进免疫疗法。

技术实现思路

1、本公开的主题提供了cd38 ccr在各种方法中的用途，例如，用于减少和/或消除cd38表达，减少和/或防止自然杀伤(nk)细胞损耗。举例来说，本公开的主题提供了减少和/或消除细胞中cd38表达的方法。在某些实施方式中，该方法包括将细胞转导成包含与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)。在某些实施方式中，该方法包括将编码与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)的核酸分子引入细胞中。

2、在某些实施方式中，cd38表达是细胞表面上cd38的表达水平。在某些实施方式中，细胞包括与抗原结合的抗原识别受体。

3、此外，本公开的主题提供了减少和/或防止自然杀伤(nk)细胞损耗的方法。在某些实施方式中，该方法包括将细胞转导成包含与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)。在某些实施方式中，该方法包括将编码与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)的核酸分子引入细胞中。

4、在某些实施方式中，nk细胞包括与抗原结合的抗原识别受体。

5、本公开的主题进一步提供了治疗和/或预防受试者中与cd38相关和/或表达cd38的疾病的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用(a)cd38药物和(b)细胞，所述细胞包含(i)与疾病组织或细胞上表达的抗原结合的抗原识别受体和(ii)与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)。

6、在某些实施方式中，疾病是肿瘤。在某些实施方式中，肿瘤选自由血液癌症、胶质母细胞瘤和实体瘤组成的组。在某些实施方式中，肿瘤是血液癌症。在某些实施方式中，血液癌症选自由多发性骨髓瘤(mm)、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、华氏巨球蛋白血病、急性淋巴细胞白血病(all)、淋巴瘤和急性髓系白血病(aml)组成的组。在某些实施方式中，肿瘤是多发性骨髓瘤。在某些实施方式中，所述抗原是磷酸化抗原。在某些实施方式中，所述抗原选自由bcma、gprc5d、fcrl5、cd41、cd48、p2ry10、cd44v6、cd70、cd123、κ轻链、nyeso-1、bob1、adgre2、clec12a、ccr1、lilrb2、cd5、cd7、cd10、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd56、bcma、cs-1、cd138、lewis抗原(ley)、wt-1和itgb7组成的组。

7、在某些实施方式中，肿瘤是实体瘤。在某些实施方式中，实体瘤选自由乳腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胃癌、食道癌和胰腺癌、肝细胞癌(hcc)和纤维板层样癌(fibrolamellar carcinoma)组成的组。在某些实施方式中，cd38药物是抗cd38抗体。在某些实施方式中，抗cd38抗体是艾萨妥昔单抗(isatuximab)或达雷木单抗(daratumumab)。

8、在某些实施方式中，细胞是免疫应答性细胞。在某些实施方式中，细胞是淋巴系细胞或髓系细胞。在某些实施方式中，细胞选自由t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞和树突细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是t细胞。在某些实施方式中，t细胞选自由细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、γδt细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(til)、调节性t细胞和自然杀伤t(nkt)细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是自然杀伤(nk)细胞。

9、在某些实施方式中，抗原识别受体选自由t细胞受体(tcr)、tcr样融合分子或嵌合抗原受体(car)组成的组。在某些实施方式中，tcr样融合分子是包括抗原结合链的重组t细胞受体(tcr)，所述抗原结合链包括：(a)以hla独立方式与抗原结合的免疫球蛋白可变区的抗原结合片段；和(b)能与cd3ζ多肽关联的恒定结构域。在某些实施方式中，恒定结构域包括天然或经修饰的t细胞受体α恒定(trac)多肽，或者天然或经修饰的t细胞受体β恒定(trbc)多肽。在某些实施方式中，cd3ζ多肽融合到共刺激分子的胞内结构域或其部分。

10、在某些实施方式中，抗原识别受体是car。在某些实施方式中，car包括细胞内结构域和与抗原结合的细胞外抗原结合结构域。在某些实施方式中，car的细胞内结构域包括cd3ζ多肽。在某些实施方式中，cd3ζ多肽是天然或经修饰的cd3ζ多肽。在某些实施方式中，经修饰的cd3ζ多肽包括天然itam1、由两个功能丧失突变组成的itam2变体和由两个功能丧失突变组成的itam3变体。在某些实施方式中，car的细胞内结构域进一步包括共刺激分子的细胞内结构域或其部分。

11、在某些实施方式中，抗原是肿瘤抗原或病原体抗原。在某些实施方式中，抗原是肿瘤抗原。在某些实施方式中，抗原是磷酸化抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原选自由cd19，碳酸酐酶ix(caix)，癌胚抗原(cea)，cd8，cd7，cd10，cd20，cd22，cd30，cd33，cll1，cd34，cd41，cd44，cd49f，cd56，cd74，cd133，cd138，cd123，cd44v6，感染巨细胞病毒(cmv)的细胞的抗原，enpp3，上皮糖蛋白-2(egp-2)，上皮糖蛋白-40(egp-40)，上皮细胞粘附分子(epcam)，受体酪氨酸蛋白激酶erb-b2、erb-b3、erb-b4，叶酸结合蛋白(fbp)，胎儿型乙酰胆碱受体(achr)，叶酸受体-α，神经节苷脂g2(gd2)，神经节苷脂g3(gd3)，人表皮生长因子受体2(her-2)，人端粒酶逆转录酶(htert)，白介素-13受体亚基α-2(il-13rα2)，κ-轻链，激酶插入结构域受体(kdr)，lewis y(ley)，l1细胞粘附分子(l1cam)，黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)，粘蛋白16(muc16)，粘蛋白1(muc1)，间皮素(msln)，erbb2，magea3，p53，mart1，gp100，蛋白酶3(pr1)，酪氨酸酶，存活素，htert，epha2，nkg2d配体，癌睾丸抗原ny-eso-1，癌胎抗原(h5t4)，前列腺干细胞抗原(psca)，前列腺特异性膜抗原(psma)，ror1，肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)，血管内皮生长因子r2(vegf-r2)，wilms肿瘤蛋白(wt-1)，bcma，gprc5d，fcrl5，itgb7，nkcs1，egf1r，egfr-viii，cd99，cd70，adgre2，ccr1，lilrb2，prame，cd48，p2ry10，cd70，bob1，clec12a，ccr1，lilrb2，cd5，cd38和cs-1组成的组。

12、在某些实施方式中，ccr包括与cd38结合的细胞外抗原结合结构域和能够向细胞传递共刺激信号但不单独向细胞传递激活信号的细胞内结构域。在某些实施方式中，ccr的细胞内结构域包括共刺激分子细胞内结构域或其部分的。在某些实施方式中，共刺激分子选自由cd28、4-1bb、ox40、cd17、cd40、cd154、cd97、cd11a/cd18、icos、dap-10、cd2、cd244、cd27和nkg2d组成的组。在某些实施方式中，共刺激分子是4-1bb。在某些实施方式中，共刺激分子是cd28。在某些实施方式中，ccr的细胞内结构域包括cd28共刺激分子的细胞内结构域和41-bb共刺激分子的细胞内结构域。

13、此外，本公开的主题提供了一种细胞，其包括(a)与抗原结合的抗原识别受体；和(b)与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)。在某些实施方式中，细胞对抗原单一阳性的细胞表现出实质(substantial)的细胞溶解活性。

14、在某些实施方式中，抗原识别受体与以1×10-8m或更小的解离常数(kd)与抗原结合。在某些实施方式中，抗原是肿瘤抗原或病原体抗原。在某些实施方式中，抗原是磷酸化抗原。在某些实施方式中，抗原是肿瘤抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原选自由cd19，碳酸酐酶ix(caix)，癌胚抗原(cea)，cd8，cd7，cd10，cd20，cd22，cd30，cd33，cll1，cd34，cd41，cd44，cd49f，cd56，cd74，cd133，cd138，cd123，cd44v6，感染巨细胞病毒(cmv)的细胞的抗原，enpp3，上皮糖蛋白-2(egp-2)，上皮糖蛋白-40(egp-40)，上皮细胞粘附分子(epcam)，受体酪氨酸蛋白激酶erb-b2、erb-b3、erb-b4，叶酸结合蛋白(fbp)，胎儿型乙酰胆碱受体(achr)，叶酸受体-α，神经节苷脂g2(gd2)，神经节苷脂g3(gd3)，人表皮生长因子受体2(her-2)，人端粒酶逆转录酶(htert)，白介素-13受体亚基α-2(il-13rα2)，κ-轻链，激酶插入结构域受体(kdr)，lewis y(ley)，l1细胞粘附分子(l1cam)，黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)，粘蛋白16(muc16)，粘蛋白1(muc1)，间皮素(msln)，erbb2，magea3，p53，mart1，gp100，蛋白酶3(pr1)，酪氨酸酶，存活素，htert，epha2，nkg2d配体，癌睾丸抗原ny-eso-1，癌胎抗原(h5t4)，前列腺干细胞抗原(psca)，前列腺特异性膜抗原(psma)，ror1，肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)，血管内皮生长因子r2(vegf-r2)，wilms肿瘤蛋白(wt-1)，bcma，gprc5d，fcrl5，itgb7，nkcs1，egf1r，egfr-viii，cd99，cd70，adgre2，ccr1，lilrb2，prame，cd48，p2ry10，cd70，bob1，clec12a，ccr1，lilrb2，cd5，cd38和cs-1组成的组。

15、在某些实施方式中，抗原识别受体选自由t细胞受体(tcr)、tcr样融合分子或嵌合抗原受体(car)组成的组。在某些实施方式中，tcr样融合分子是包括抗原结合链的重组t细胞受体(tcr)，所述抗原结合链包括：(a)以hla独立方式与抗原结合的免疫球蛋白可变区的抗原结合片段；和(b)能与cd3ζ多肽关联的恒定结构域。在某些实施方式中，恒定结构域包括天然或经修饰的trac多肽，或者天然或经修饰的trbc多肽。在某些实施方式中，cd3ζ多肽被融合到共刺激分子的细胞内结构域或其部分。

16、在某些实施方式中，抗原识别受体是car。在某些实施方式中，car包括细胞内结构域和与抗原结合的细胞外抗原结合结构域。在某些实施方式中，car的细胞内结构域包括cd3ζ多肽。在某些实施方式中，cd3ζ多肽是天然或经修饰的cd3ζ多肽。在某些实施方式中，经修饰的cd3ζ多肽包括天然itam1、由两个功能丧失突变组成的itam2变体和由两个功能丧失突变组成的itam3变体。在某些实施方式中，car的细胞内结构域进一步包括共刺激分子的细胞内结构域或其部分。

17、在某些实施方式中，ccr包括与cd38结合的细胞外抗原结合结构域和能够向细胞传递共刺激信号但不单独向细胞传递激活信号的细胞内结构域。在某些实施方式中，ccr的细胞内结构域包括共刺激分子的细胞内结构域或其部分。在某些实施方式中，共刺激分子选自由cd28、4-1bb、ox40、cd17、cd40、cd154、cd97、cd11a/cd18、icos、dap-10、cd2、nkg2d、cd244和cd27组成的组。在某些实施方式中，共刺激分子是4-1bb。在某些实施方式中，共刺激分子是cd28。在某些实施方式中，ccr的细胞内结构域包括cd28共刺激分子的细胞内结构域和41-bb共刺激分子的细胞内结构域。

18、在某些实施方式中，细胞是免疫应答性细胞。在某些实施方式中，细胞选自由t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞和树突细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是t细胞。在某些实施方式中，t细胞选自由细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、γδt细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(til)、调节性t细胞和自然杀伤t(nkt)细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是自然杀伤(nk)细胞。

19、本公开的主题还提供了含有本文公开的细胞的组合物。在某些实施方式中，组合物是包含有药学上可接受载体的药物组合物。

20、此外，本公开的主题提供了核酸组合物，其包括(a)编码与抗原结合的抗原识别受体的第一多核苷酸；和(b)编码与cd38结合的嵌合共刺激受体(ccr)的第二多核苷酸。在某些实施方式中，包含所述组合物的细胞对抗原单一阳性的细胞表现出实质的细胞溶解活性。本公开的主题还提供了核酸组合物，其包括(a)编码与cd38结合的抗原识别受体的第一多核苷酸；和(b)编码与抗原结合的嵌合共刺激受体(ccr)的第二多核苷酸。

21、本公开的主题还提供了包括本文公开的核酸组合物的载体。

22、此外，本公开的主题提供了包括本文公开的核酸组合物的细胞。在某些实施方式中，细胞是免疫应答性细胞。在某些实施方式中，细胞选自由t细胞、b细胞、自然杀伤(nk)细胞和树突细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是t细胞。在某些实施方式中，t细胞选自由细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、γδt细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(til)、调节性t细胞和自然杀伤t(nkt)细胞组成的组。在某些实施方式中，细胞是自然杀伤(nk)细胞。

23、本公开的主题提供了治疗和/或预防受试者中肿瘤和/或病原体感染的方法。在某些实施方式中，该方法包括向受试者施用本文公开的细胞或组合物。在某些实施方式中，肿瘤或病原体感染与cd38相关和/或表达cd38。在某些实施方式中，该方法进一步包括给受试者施用cd38药物。在某些实施方式中，cd38药物是抗cd38抗体。

24、本公开的主题进一步提供了免疫细胞，例如t细胞或nk细胞，其表达嵌合抗原受体(car)和嵌合共刺激受体(ccr)，其中car包括：细胞内cd3ζ信号传导结构域，共刺激cd28细胞内结构域，cd28跨膜结构域和与第一抗原结合的抗原特异性结合结构域；其中ccr包括：共刺激cd28细胞内结构域和共刺激4-1bb细胞内结构域，cd28跨膜结构域和与第二抗原结合的抗原特异性结合结构域；其中抗原特异性结合结构域存在于所述免疫细胞的表面，并且其中所述第一抗原与所述第二抗原不同。

25、在某些实施方式中，所述第一抗原和第二抗原选自由cd41、cd48、p2ry10、cd44v6、cd70、cd123、κ轻链、nyeso-1、bob1、adgre2、clec12a、ccr1、lilrb2、cd5、cd7、cd10、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd56、bcma、cs-1、cd138、lewis抗原(ley)和wt-1组成的组。所述第一抗原和第二抗原可以选自由cd41、cd48、p2ry10、cd44v6、cd70、cd123、κ轻链、nyeso-1、bob1、adgre2、clec12a、ccr1、lilrb2、cd5、cd7、cd10、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd56、bcma、cs-1、cd138、lewis抗原(ley)和wt-1组成的组。

26、所述第一抗原可以是cd19。所述第二抗原可以是cd38。

27、car的细胞内信号传导结构域可包括人cd3ζ的细胞内结构域或其变体。细胞内结构域包括人共刺激cd28细胞内结构域和人共刺激4-1bb细胞内结构域，或它们的变体。

28、car的抗原特异性结合结构域可以是单链结合结构域，例如单链fv片段。ccr的抗原特异性结合结构域是单链结合结构域，例如单链fv片段。在某些实施方式中，car的抗原特异性结合结构域是单链结合结构域，例如单链fv片段，并且ccr的抗原特异性结合结构域是单链结合结构域，例如单链fv片段。

29、在某些实施方式中，car和ccr的共刺激cd28细胞内结构域大致是相同的。

30、本公开的主题还提供了一种核酸分子，其使如上文所限定的嵌合抗原受体(car)和嵌合共刺激受体(ccr)能在合适的免疫细胞，例如人t细胞或人nk细胞中表达。所述核酸分子可以存在于载体中，例如病毒载体中。

31、本公开的主题还提供了药物组合物，其包括根据本发明的免疫细胞或根据本发明的核酸分子。

32、本公开的主题还提供了产生根据本发明的免疫细胞的方法，包括：提供免疫细胞，例如人免疫细胞，如人t细胞或人nk细胞，；和通过使上文所限定的car和ccr在免疫细胞中表达来修饰免疫细胞。

33、本公开的主题还提供了治疗患者中恶性肿瘤，例如血液恶性肿瘤的方法，该方法包括：分离免疫细胞，例如t细胞或nk细胞，由此所述免疫细胞从患者中分离出来；通过使上文所限定的car和ccr能在免疫细胞中表达来修饰免疫细胞；和向患者施用经修饰的免疫细胞。

34、在治疗患者中恶性肿瘤(例如血液恶性肿瘤)的某些方法中，该方法包括施用包含根据本发明的免疫细胞或根据本发明的核酸分子的药物组合物。

35、在治疗患者中恶性肿瘤(例如血液恶性肿瘤)的某些实施方式中，该方法进一步包括施用检查点抑制剂。