本公开涉及小分子化学、分子生物学、基因疗法、细胞疗法、免疫学和免疫细胞信号传导领域中的小分子调节的细胞信号传导表达系统。本公开的表达系统使用模块化设计和可变结构域来靶向细胞表面抗原，并且在受体-配体相互作用时引导信号传导级联，由此驱动细胞功能。
背景技术：
1、控制二聚化或蛋白酶活性的小分子药物可以用于控制细胞和基因疗法的活性，以提高功效和安全性。为了开发有效且安全的下一代细胞和基因疗法，包含针对癌症的免疫治疗方法，对利用模块化设计和car的可变结构域的技术的需要日益增加，所述car可以靶向一系列细胞表面抗原，并且在受体-配体相互作用时引导信号传导级联。
技术实现思路
1、本公开提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括与二聚化结构域可操作地连接的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包括包含抗原感测结构域的细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且其中所述嵌合多肽在细胞内与所述二聚化结构域可操作地连接。
2、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括t细胞受体(tcr)、嵌合抗原受体(car)或嵌合受体。
3、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测结构域包括以下中的一种或多种：(a)重链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合(cdr)；(b)重链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合和轻链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合；(c)基于纤连蛋白的支架；其中抗原感测区与靶抗原特异性结合。在一些实施例中，所述基于纤连蛋白的支架包括centyrin。在一些实施例中，所述基于纤连蛋白的支架包括iii型纤连蛋白(fn3)结构域。
4、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测区包括从哺乳动物序列分离的或源自其的一个或多个序列。在一些实施例中，抗原感测区包括从人序列分离的或源自其的一个或多个序列。
5、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测区包括人源化或全人抗体。在一些实施例中，所述抗原感测区包括单链可变片段(scfv)。在一些实施例中，所述抗原感测区包括抗体模拟物。在一些实施例中，所述抗原感测区包括单体。
6、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述铰链区包括从cd4(分化簇4)多肽、cd8(分化簇8)多肽或cd28(分化簇28)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述铰链区包括从人序列分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述铰链区和所述间隔子序列是相同的结构域。在一些实施例中，所述铰链区和所述间隔子序列是不同的结构域。
7、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述间隔子序列包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述间隔子序列包括从人序列分离的或源自其的序列。
8、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述安全开关包括从表皮生长因子受体(egfr)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述安全开关包括截短的egfr(egfrt)多肽。在一些实施例中，当egfrt与利妥昔单抗(rituximab)结合时，组合导致细胞死亡。在一些实施例中，所述egfrt包括序列mlllvtslllcelphpaflliprkvcngigige。在一些实施例中，所述安全开关包括从人序列分离的或源自其的序列。
9、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
10、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述细胞内结构域包括一个或多个共刺激结构域。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从cd3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cd28多肽、4-1bb(分化簇137)多肽、icos(诱导型t细胞共刺激分子)多肽、ox40多肽或cd27(分化簇27)多肽。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括(a)第一共刺激结构域，所述第一共刺激结构域包括从cd28多肽、4-1bb多肽或icos多肽分离的或源自其的序列；以及(b)第二共刺激结构域，所述第二共刺激结构域包括从4-1bb多肽、ox40多肽或cd27多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
11、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括诱导型细胞因子结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，所述诱导型细胞因子结构域包括能够诱导il-12细胞因子的表达的经激活的t细胞的核因子(nfat)多肽。
12、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括细胞因子受体的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，细胞因子受体的所述细胞内结构域包括il-2受体β(il-2rβ)链片段。在一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括信号转导子和转录激活子(stat3/5)结合基序的细胞内结构域。
13、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)序列的细胞内结构域。
14、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述融合蛋白从氨基到羧基末端包括所述嵌合多肽、接头和所述二聚化结构域。在一些实施例中，所述接头包括以下中的一种或多种：dna序列、rna序列、氨基酸序列和聚合物。在一些实施例中，所述接头包括序列ggggs；或所述接头包括介于2个与20个氨基酸之间的长度；或所述接头包括包含甘氨酸(g)和丝氨酸(s)的序列。在一些实施例中，所述接头包括寡聚化结构域。在一些实施例中，所述寡聚化结构域包括以下序列：
15、seyeirkaleelkastaelkrataslrasteelkknpsedalvennrlivehnaiivennriiaavlelivraik(三聚体)；
16、trteiirelerslreqeelakrlkellrelerlqregssdedvrellreikelveeieklareqkylveelkrqd(二聚体)；
17、trrkqemkrlkkemekireeteevkkeieeskkrpqsesaknlilimqllinqirllalqirmlalqlqe(五聚体)；或
18、tedeirklrklleeaekklkkledktrrseeisktdddpkaqslqliaeslmliaeslliiaislllssrng(六聚体)。
19、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述二聚化结构域包括ns3a多肽。在一些实施例中，所述ns3a多肽包括序列(a)makgsvvivgrinlsgdtaysqqtrgllgciitsatgrdknqvdgevqvlstatqsflatcvngvcwtvyhgagsktlagpkgpitqmytnvdqdlvgwpappgarsmtpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpvsylkgsaggpllcpsghvvgifraavctrgvakavdfipvesmettmrsp；或(b)mkkkgsvvivgrinlsgdtaysqqtrglegcqetsqtgrdknqvegevqvvstatqsflatsingvlwtvyhgagtrtiaspkgpvtqmytnvdkdlvgwqapqgsrsltpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpisylkgsaggpllcpaghavgifraavstrgvakavdfipveslettmrsp；或(c)kkkgsvvivgrinlsgdtayaqqtrgeegcqetsqtgrdknqvegevqivstatqtflatsingvlwtvyhgagtrtiaspkgpvtqmytnvdkdlvgwqapqgsrsltpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpisylkgsaggpllcpaghavgifraavstrgvakavdfipveslettmrsp.。
20、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述二聚化结构域包括dncr多肽。在一些实施例中，所述dncr多肽包括序列
21、ssdeeearelierakeaaeraqeaaertgdprvrelarelkrlaqeaaee
22、vkrdpsssdvnealkliveaieaavdaleaaertgdpevrelarelvrla
23、veaaeevqrnpsssdvnealhsivyaieaaifaleaaertgdpevrelare
24、lvrlaveaaeevqrnpssrnvehalmrivlaiylaeenlreaeesgdpekrekarervreaveraeevqrdpsgwlnh.。
25、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述二聚化结构域包括gncr多肽。在一些实施例中，所述gncr多肽包括序列
26、dieklckkaeeeakeaqekadelrqrhpdsqaaedaedlanlavaavlt
27、acllaqehpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhpdsqaardaik
28、lasqaaravilaimlaaenpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhp
29、dsqaardaiklasqaaeaveraiwlaaenpnadiakkcikaaseaaeeaskaaeeaqrhpdsqkardeikeasqkaeevkercks.。
30、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述二聚化结构域包括apo ns3a阅读子(anr)多肽。在一些实施例中，所述anr多肽包括序列
31、geldelvylldgpgydpihsdvvtrggshlfnf.。
32、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述融合蛋白进一步包括杀伤结构域。在一些实施例中，所述杀伤结构域包括从以下分离的或源自其的序列：胱天蛋白酶-9(cas9)多肽、胱天蛋白酶-1(cas1多肽)、胱天蛋白酶-4(cas4)多肽、受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶1(ripk1)、受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3(ripk3)多肽或其催化结构域。
33、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，包含那些包括嵌合多肽的融合蛋白，所述融合蛋白进一步包括可切割肽。在一些实施例中，所述可切割肽包括p2a序列或t2a序列。在一些实施例中，所述p2a序列包括序列gsgatnfsllkqagdveenpgp。在一些实施例中，所述t2a序列包括序列gsgegrgslltcgdveenpg.。
34、本公开提供了第二融合蛋白，所述第二融合蛋白包括与二聚化结构域可操作地连接的信号传导结构域，其中(a)在存在小分子诱导物的情况下，所述二聚化结构域能够与本公开的第一融合蛋白的所述二聚化结构域形成二聚体，或(b)在存在抑制剂的情况下，包括所述第二融合蛋白的所述二聚化结构域和所述第一融合蛋白的所述二聚化结构域的二聚体可以被破坏。
35、在本公开的一些实施例中，所述第二融合蛋白进一步包括衔接子序列、跨膜结构域和共刺激结构域中的一个或多个。在一些实施例中，所述衔接子序列包括从dap10多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述dap10多肽包括序列mihlghilfllllpvaaaqttpgersslpafypgtsgscsgcgslslpllaglvaadavasllivgavflcarprrspaqedgkvyinmpgrg或与其具有至少90％同一性的序列。在一些实施例中，所述衔接子序列包括从表皮生长因子受体(egfr)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述安全开关包括截短的egfr(egfrt)多肽。在一些实施例中，当egfrt与利妥昔单抗结合时，组合导致细胞死亡。在一些实施例中，所述egfrt包括序列mlllvtslllcelphpaflliprkvcngigige。在一些实施例中，所述衔接子序列包括从人序列分离的或源自其的序列。
36、在本公开的一些实施例中，所述第二融合蛋白进一步包括衔接子序列、跨膜结构域和共刺激结构域中的一个或多个。在一些实施例中，所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
37、在本公开的一些实施例中，所述第二融合蛋白进一步包括衔接子序列、跨膜结构域和共刺激结构域中的一个或多个。在一些实施例中，所述共刺激结构域包括从cd3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cd28多肽、4-1bb多肽、icos多肽、ox40多肽或cd27多肽。在一些实施例中，所述共刺激结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
38、在本公开的一些实施例中，所述第二融合蛋白从氨基到羧基末端包括所述二聚化结构域、接头和调控结构域。在一些实施例中，所述接头包括以下中的一种或多种：dna序列、rna序列、氨基酸序列和聚合物。在一些实施例中，所述接头包括序列ggggs；或所述接头包括介于2个与20个氨基酸之间的长度；或所述接头包括包含甘氨酸(g)和丝氨酸(s)的序列。在一些实施例中，所述接头包括寡聚化结构域。在一些实施例中，所述寡聚化结构域包括以下序列：
39、seyeirkaleelkastaelkrataslrasteelkknpsedalvennrlivehnaiivennriiaavlelivraik(三聚体)；
40、trteiirelerslreqeelakrlkellrelerlqregssdedvrellreikelveeieklareqkylveelkrqd(二聚体)；
41、trrkqemkrlkkemekireeteevkkeieeskkrpqsesaknlilimqllinqirllalqirmlalqlqe(五聚体)；或
42、tedeirklrklleeaekklkkledktrrseeisktdddpkaqslqliaeslmliaeslliiaislllssrng(六聚体)。
43、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述二聚化结构域包括ns3a多肽。在一些实施例中，所述ns3a多肽包括序列(a)makgsvvivgrinlsgdtaysqqtrgllgciitsatgrdknqvdgevqvlstatqsflatcvngvcwtvyhgagsktlagpkgpitqmytnvdqdlvgwpappgarsmtpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpvsylkgsaggpllcpsghvvgifraavctrgvakavdfipvesmettmrsp；或(b)mkkkgsvvivgrinlsgdtaysqqtrglegcqetsqtgrdknqvegevqvvstatqsflatsingvlwtvyhgagtrtiaspkgpvtqmytnvdkdlvgwqapqgsrsltpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpisylkgsaggpllcpaghavgifraavstrgvakavdfipveslettmrsp；或(c)kkkgsvvivgrinlsgdtayaqqtrgeegcqetsqtgrdknqvegevqivstatqtflatsingvlwtvyhgagtrtiaspkgpvtqmytnvdkdlvgwqapqgsrsltpctcgssdlylvtrhadvipvrrrgdsrgsllsprpisylkgsaggpllcpaghavgifraavstrgvakavdfipveslettmrsp。在一些实施例中，所述第一融合蛋白包括包含dncr多肽、gncr多肽或anr多肽的二聚化结构域。
44、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述二聚化结构域包括dncr多肽。在一些实施例中，所述dncr多肽包括序列ssdeeearelierakeaaeraqeaaertgdprvrelarelkrlaqeaaeevkrdpsssdvnealkliveaieaavdaleaaertgdpevrelarelvrlaveaaeevqrnpsssdvnealhsivyaieaaifaleaaertgdpevrelarelvrlaveaaeevqrnpssrnvehalmrivlaiylaeenlreaeesgdpekrekarervreaveraeevqrdpsgwlnh。
45、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述二聚化结构域包括gncr多肽。在一些实施例中，所述gncr多肽包括序列dieklckkaeeeakeaqekadelrqrhpdsqaaedaedlanlavaavltacllaqehpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhpdsqaardaiklasqaaravilaimlaaenpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhpdsqaardaiklasqaaeaveraiwlaaenpnadiakkcikaaseaaeeaskaaeeaqrhpdsqkardeikeasqkaeevkercks。
46、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述二聚化结构域包括apo ns3a阅读子(anr)多肽。在一些实施例中，所述anr多肽包括序列geldelvylldgpgydpihsdvvtrggshlfnf。
47、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，包含其中所述二聚化结构域包括dncr多肽、gncr多肽或anr多肽的那些第二融合蛋白，所述第一融合蛋白包括包含ns3a多肽的二聚化结构域。
48、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述第二融合蛋白质进一步包括杀伤结构域。在一些实施例中，所述杀伤结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cas9多肽、cas1多肽、cas4多肽、ripk1多肽、ripk3多肽或其催化结构域。
49、在本公开的第二融合蛋白的一些实施例中，所述第二融合蛋白进一步包括可切割肽。在一些实施例中，所述可切割肽包括p2a序列或t2a序列。在一些实施例中，所述p2a序列包括序列gsgatnfsllkqagdveenpgp。在一些实施例中，所述t2a序列包括序列gsgegrgslltcgdveenpg。
50、本公开提供了一种编码本公开的融合蛋白的核酸。在一些实施例中，核酸编码本公开的第一融合蛋白。在一些实施例中，核酸编码本公开的第二融合蛋白。在一些实施例中，核酸编码本公开的第一融合蛋白和第二融合蛋白。
51、在本公开的核酸的一些实施例中，所述核酸进一步包括内部核糖体进入序列(ires)。在一些实施例中，所述ires包括序列cctctccctcccccccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatgtgattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgagggcccggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcagttcctctggaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgccacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctctcctcaagcgtattcaacaaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcggtgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaaacgtctaggccccccgaaccacggggacgtggttttcctttgaaaaacacgatgataagcttgccacaaccc.。
52、在本公开的核酸的一些实施例中，所述核酸进一步包括以下中的一种或多种：启动子、增强子、内含子、外显子、非翻译区(utr)和翻译后调控元件(pre)。在一些实施例中，所述启动子包括诱导型启动子。在一些实施例中，所述诱导型启动子包括从以下分离的或源自其的序列：yb_tata启动子、人β珠蛋白启动子(hubg)、minil2启动子、最小cmv(mincmv)启动子和tre3g启动子。在一些实施例中，所述启动子包括组成型启动子。在一些实施例中，所述组成型启动子包括从以下分离的或源自其的序列：mnd启动子、hpgk启动子、cmv启动子、cag启动子、sffv启动子、ef1α启动子、ubc启动子和cd43启动子。
53、本公开提供了一种载体，其包括本公开的核酸。在一些实施例中，所述核酸编码本公开的融合蛋白。在一些实施例中，所述核酸编码本公开的第一融合蛋白和第二融合蛋白。在一些实施例中，所述载体包括编码本公开的第一融合蛋白的第一核酸和编码本公开的第二核酸的第二核酸。在一些实施例中，第一载体包括编码本公开的第一融合蛋白的核酸，并且第二载体包括本公开的第二融合蛋白。
54、在本公开的载体的一些实施例中，所述载体包括能够驱动哺乳动物细胞中核酸的表达的表达载体。在一些实施例中，所述表达载体包括质粒。在一些实施例中，所述表达载体是克隆载体。
55、在本公开的载体的一些实施例中，所述载体包括能够将核酸引入哺乳动物细胞的递送载体。在一些实施例中，所述递送载体包括以下中的一种或多种：病毒载体、非病毒载体、脂质体、胶束、聚合物囊泡和纳米颗粒。在一些实施例中，所述病毒载体包括从病毒基因组分离的或源自其的一个或多个序列。
56、本公开提供了包括本公开的融合蛋白、本公开的核酸或本公开的载体的细胞。在一些实施例中，所述细胞是哺乳动物细胞。在一些实施例中，所述细胞是人细胞。在一些实施例中，所述细胞是体细胞。在一些实施例中，所述细胞是干细胞。在一些实施例中，所述细胞不是人类胚胎干细胞。在一些实施例中，所述细胞是离体或体外的。在一些实施例中，所述细胞是体内的。在一些实施例中，所述细胞是免疫细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞或其前体。在一些实施例中，所述前体是造血干细胞(hsc)。
57、在本公开的细胞的一些实施例中，包含表达本公开的第一融合蛋白和本公开的第二融合蛋白的那些细胞，所述细胞进一步包括小分子诱导物。在一些实施例中，所述小分子诱导物包括达诺瑞韦(danoprevir)。在一些实施例中，包含其中所述小分子诱导物包括达诺瑞韦的那些实施例，所述第一融合蛋白或所述第二融合蛋白的所述二聚化结构域包括dncr多肽。在一些实施例中，所述小分子诱导物包括格佐匹韦(grazoprevir)。在一些实施例中，包含其中所述小分子诱导物包括格佐匹韦的那些实施例，所述第一融合蛋白或所述第二融合蛋白的所述二聚化结构域包括gncr多肽。
58、在本公开的细胞的一些实施例中，包含表达本公开的第一融合蛋白和本公开的第二融合蛋白的那些细胞，所述细胞进一步包括抑制剂。在一些实施例中，所述抑制剂包括ns3a抑制剂。在一些实施例中，所述抑制剂包括小分子。在一些实施例中，(a)所述第一融合蛋白包括包含ns3a多肽的二聚化结构域，并且所述第二融合蛋白包括包含anr多肽的二聚化结构域；或(b)所述第一融合蛋白包括包含anr多肽的二聚化结构域，并且所述第二融合蛋白包括包含ns3a多肽的二聚化结构域；并且所述抑制剂包括达诺瑞韦或格佐匹韦。
59、本公开提供包括本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体或本公开的细胞的组合物。
60、在本公开的组合物的一些实施例中，包含包括本公开的第一融合蛋白和本公开的第二融合蛋白的那些组合物，所述组合物进一步包括小分子诱导物。在一些实施例中，所述小分子诱导物包括达诺瑞韦。在一些实施例中，包含其中所述小分子诱导物包括达诺瑞韦的那些实施例，所述第一融合蛋白或所述第二融合蛋白的所述二聚化结构域包括dncr多肽。在一些实施例中，所述小分子诱导物包括格佐匹韦。在一些实施例中，包含其中所述小分子诱导物包括格佐匹韦的那些实施例，所述第一融合蛋白或所述第二融合蛋白的所述二聚化结构域包括gncr多肽。
61、在本公开的组合物的一些实施例中，包含表达本公开的第一融合蛋白和本公开的第二融合蛋白的那些组合物，所述组合物进一步包括抑制剂。在一些实施例中，所述抑制剂包括ns3a抑制剂。在一些实施例中，所述抑制剂包括小分子。在一些实施例中，(a)所述第一融合蛋白包括包含ns3a多肽的二聚化结构域，并且所述第二融合蛋白包括包含anr多肽的二聚化结构域；或(b)所述第一融合蛋白包括包含anr多肽的二聚化结构域，并且所述第二融合蛋白包括包含ns3a多肽的二聚化结构域；并且所述抑制剂包括达诺瑞韦或格佐匹韦。
62、本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本公开的组合物和药学上可接受的载体。
63、本公开提供了本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体、本公开的细胞、本公开的组合物或本公开的药物组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。在一些实施例中，所述疾病或病症包括以下中的一种或多种：自身免疫性疾病或病症；炎性疾病或病症；免疫缺陷疾病或病症；以及增殖性疾病或病症。在一些实施例中，所述疾病或病症包括癌症。在一些实施例中，所述疾病或病症包括由传染病引起的感染或疾病或病症。在一些实施例中，所述疾病或病症包括遗传性疾病或病症。
64、本公开提供了本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体、本公开的细胞、本公开的组合物或本公开的药物组合物用于治疗疾病或病症的用途。
65、在本公开的用途的一些实施例中，所述疾病或病症包括以下中的一种或多种：自身免疫性疾病或病症；炎性疾病或病症；免疫缺陷疾病或病症；缺血性疾病或病症；血液疾病或病症；骨病或病症；神经系统疾病或病症；心脏病或病症；血管疾病或病症；代谢疾病或病症；皮肤疾病或病症；消化系统疾病或病症；线粒体疾病或病症；肌肉疾病或病症；肝病或病症；肾病或病症；听力疾病或病症；眼科疾病或病症；以及增殖性疾病或病症。
66、在本公开的用途的一些实施例中，所述疾病或病症包括癌症。在一些实施例中，所述癌症包括以下中的一种或多种：成人急性淋巴细胞性白血病(all)、成人急性髓细胞性白血病(aml)、肾上腺癌、肛门癌、基底和鳞状细胞皮肤癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、成人脑和脊髓肿瘤、儿童脑和脊髓肿瘤、乳腺癌、男性乳腺癌、青少年癌症、儿童癌症、年轻成人癌症、不明原发性癌症、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性骨髓单核细胞性白血病(cmml)、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、尤文氏肿瘤家族(ewingfamily of tumors)、眼癌(眼黑色素瘤)、胆囊癌、胃肠道神经内分泌(类癌)肿瘤、胃肠道间质瘤(gist)、头颈癌、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin lymphoma)、卡波西肉瘤(kaposisarcoma)、肾癌、喉和下咽癌、白血病、儿童白血病、肝癌、肺癌、肺类癌瘤、淋巴瘤、皮肤淋巴瘤、恶性间皮瘤、黑色素瘤皮肤癌、默克尔细胞皮肤癌(merkel cell skin cancer)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma)、儿童非霍奇金氏淋巴瘤、口腔(口)和口咽(喉)癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(net)、阴茎癌、垂体瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(waldenstrom macroglobulinemia)和维尔姆斯瘤(wilms tumor)。
67、在本公开的用途的一些实施例中，所述疾病或病症包括由传染病引起的感染或疾病或病症。
68、在本公开的用途的一些实施例中，所述疾病或病症包括遗传性疾病或病症。
69、本公开提供了一种治疗疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体、本公开的细胞、本公开的组合物或本公开的药物组合物，其中所述疾病或病症的体征或症状的严重程度降低，由此治疗所述疾病或病症。
70、本公开提供了一种预防疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体、本公开的细胞、本公开的组合物或本公开的药物组合物或本公开的药物组合物，其中所述疾病或病症的体征或症状的发作或复发被延迟或被抑制，由此预防所述疾病或病症。
71、在本公开的方法的一些实施例中，所述疾病或病症包括以下中的一种或多种：自身免疫性疾病或病症；炎性疾病或病症；免疫缺陷疾病或病症；缺血性疾病或病症；血液疾病或病症；骨病或病症；神经系统疾病或病症；心脏病或病症；血管疾病或病症；代谢疾病或病症；皮肤疾病或病症；消化系统疾病或病症；线粒体疾病或病症；肌肉疾病或病症；肝病或病症；肾病或病症；听力疾病或病症；眼科疾病或病症；以及增殖性疾病或病症。
72、在本公开的方法的一些实施例中，所述疾病或病症包括癌症。在一些实施例中，所述癌症包括以下中的一种或多种：成人急性淋巴细胞性白血病(all)、成人急性髓细胞性白血病(aml)、肾上腺癌、肛门癌、基底和鳞状细胞皮肤癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、成人脑和脊髓肿瘤、儿童脑和脊髓肿瘤、乳腺癌、男性乳腺癌、青少年癌症、儿童癌症、年轻成人癌症、不明原发性癌症、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性骨髓单核细胞性白血病(cmml)、结直肠癌、子宫内膜癌、食管癌、尤文氏肿瘤家族、眼癌(眼黑色素瘤)、胆囊癌、胃肠道神经内分泌(类癌)肿瘤、胃肠道间质瘤(gist)、头颈癌、霍奇金氏淋巴瘤、卡波西肉瘤、肾癌、喉和下咽癌、白血病、儿童白血病、肝癌、肺癌、肺类癌瘤、淋巴瘤、皮肤淋巴瘤、恶性间皮瘤、黑色素瘤皮肤癌、默克尔细胞皮肤癌、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、儿童非霍奇金氏淋巴瘤、口腔(口)和口咽(喉)癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(net)、阴茎癌、垂体瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和维尔姆斯瘤。
73、在本公开的方法的一些实施例中，所述疾病或病症包括由传染病引起的感染或疾病或病症。
74、在本公开的方法的一些实施例中，所述疾病或病症包括遗传性疾病或病症。
75、本公开提供了一种预防疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的本公开的融合蛋白、本公开的核酸、本公开的载体、本公开的细胞、本公开的组合物或本公开的药物组合物或本公开的药物组合物，其中所述疾病或病症的体征或症状的发作或复发被延迟或被抑制，由此预防所述疾病或病症。
76、本公开提供了一种包括一种或多种载体的多核苷酸集合，所述一种或多种载体包括：(a)编码包括与第一二聚化多肽连接的第一信号传导结构域的第一融合蛋白的第一多核苷酸；以及(b)编码包括与第二二聚化多肽连接的第二信号传导结构域或寡聚化结构域的第二融合蛋白的第二多核苷酸；并且其中所述第一二聚化多肽和所述第二二聚化多肽被选择为使得所述第一二聚化多肽与所述第二二聚化多肽的相互作用由小分子的存在介导。
77、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，细胞中的信号传导功能相对于向所述细胞施用所述小分子是诱导型的。
78、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述小分子介导第一二聚化多肽和第二二聚化多肽的结合。
79、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述小分子破坏第一二聚化多肽和第二二聚化多肽的结合。
80、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述小分子选自由达诺瑞韦和格佐匹韦组成的组。
81、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)第一小分子介导所述第一二聚化多肽和所述第二二聚化多肽的结合；(b)第二小分子破坏所述第一二聚化多肽和所述第二二聚化多肽的结合；(c)所述第二小分子可以介导第三二聚化多肽与所述第一二聚化多肽的结合，并且(d)所述第三二聚化多肽与信号传导结构域连接。
82、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述第二小分子通过竞争胜过所述第一小分子而破坏所述第一二聚化多肽和所述第二二聚化多肽的结合。
83、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)所述第一小分子是格佐匹韦或其类似物或衍生物；并且(b)所述第二小分子是达诺瑞韦或其类似物或衍生物。
84、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的一个或两个是细胞质蛋白。
85、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的一个或两个是跨膜蛋白。
86、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的一个或两个包括跨膜结构域。
87、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的一个是跨膜蛋白；并且(b)所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白中的一个是细胞质蛋白。
88、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述多核苷酸集合包括与所述第一二聚化多肽或所述第二二聚化多肽连接的多个信号传导结构域。
89、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述多核苷酸集合包括具有与所述第一二聚化多肽或所述第二二聚化多肽连接的一个或多个蛋白质结构域的跨膜受体。
90、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，与所述第一二聚化多肽连接的信号传导结构域和与所述第二二聚化多肽连接的信号传导结构域相同或基本上相同。
91、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，与所述第一二聚化多肽连接的信号传导结构域和与所述第二二聚化多肽连接的信号传导结构域不同或基本上不同。
92、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述多核苷酸集合包括至少两种载体，所述载体包括：(a)包括编码所述第一融合蛋白的多核苷酸的第一载体；以及(b)包括编码所述第二融合蛋白的多核苷酸的第二载体。
93、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，载体主链包括所述多核苷酸集合。在一些实施例中，所述载体主链选自由以下的主链组成的组：腺病毒载体、慢病毒载体、杆状病毒载体、爱泼斯坦·巴尔病毒载体(epstein barr viral vector)、乳多空病毒载体、痘苗病毒载体、单纯疱疹病毒载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒(aav)载体和转座子载体。在一些实施例中，所述载体主链包括同源性定向修复载体。
94、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，染色体包括所述多核苷酸集合。
95、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，编码第一融合蛋白的多核苷酸和编码所述第二融合蛋白的多核苷酸通过分离元件分离，所述分离元件包括阻止所述第一融合蛋白和所述第二融合蛋白的融合的多核苷酸序列。在一些实施例中，所述分离元件包括包含核糖体跳跃序列的多核苷酸序列。在一些实施例中，所述分离元件包括包含至少两个核糖体跳跃序列的多核苷酸序列。在一些实施例中，所述分离元件包括包含p2a和/或t2a的多核苷酸序列。在一些实施例中，所述分离元件包括选自由以下组成的组的多核苷酸序列：p2a、t2a、t2a-rfp-p2a、p2a-t2a、t2a-p2a和ires。在一些实施例中，所述分离元件包括包含组成型启动子的多核苷酸序列。
96、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)与所述二聚化多肽连接的所述信号传导结构域是嵌合抗原受体(car)的一部分；并且(b)所述小分子的施用调节t细胞信号传导功能。
97、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)所述第一融合蛋白包括与缺乏cd3ζ结构域的跨膜car的细胞质端连接的ns3a，(b)所述第二融合蛋白包括与cd3ζ结构域连接的anr肽；并且其中所述小分子下调car t细胞信号传导。
98、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)所述第一融合蛋白包括与缺乏cd3ζ结构域的跨膜car的细胞质端连接的ns3a；(b)所述第二融合蛋白包括与cd3ζ结构域连接的dncr2(或其设计的变体，包含但不限于dncr2_1至dncr2_34和dncr2-3rep)或gncr1(或其设计的变体，包含但不局限于gncr1-3rep、g33和g38)，并且其中所述小分子的施用激活cart细胞信号传导。在一些实施例中，所述融合蛋白进一步包括跨膜结构域和/或共刺激结构域。
99、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，(a)第一信号传导结构域和第二信号传导结构域包括杀伤结构域；并且(b)所述小分子的施用诱导细胞死亡。
100、在本公开的多核苷酸集合的一些实施例中，所述第一信号传导结构域和所述第二信号传导结构域中的任一个或两个选自由以下组成的组：胱天蛋白酶-9、胱天蛋白酶-1、胱天蛋白酶-4、ripk1或ripk3、其突变的变体，以及前述任一种的组合。在一些实施例中，所述第一信号传导结构域和所述第二信号传导结构域中的任一个或两个包括胱天蛋白酶-9或其变体的催化结构域。在一些实施例中，(a)所述第一信号传导结构域包括胱天蛋白酶-9或其变体的催化结构域；并且(b)所述第二信号传导结构域包括胱天蛋白酶-9或其变体的催化结构域。在一些实施例中，(a)所述第一信号传导结构域包括胱天蛋白酶-9或其变体的催化结构域；并且(b)所述第二二聚化多肽与同源寡聚化结构域连接。在一些实施例中，(a)所述第一二聚化多肽选自以下组：与杀伤结构域连接的dncr2(或其设计的变体，包含但不限于dncr2_1至dncr2_34和dncr2-3rep)或gncr1(或其变体，包含但不限于gncr1-3rep、g33和g38)，并且(b)所述第二二聚化多肽是ns3a，并且与选自由以下组成的组的同源寡聚化结构域连接：二聚体-ns3ah1、三聚体-n3ah1、五聚体-ns3ah1、六聚体-ns3a或其变体。在一些实施例中，(a)所述第一二聚化多肽选自由以下组成的组：dncr2(或其设计的变体，包含但不限于dncr2_1至dncr2_34和dncr2-3rep)或gncr1(或其变体，包含但不限于gncr1-3rep、g33和g38)；并且(b)所述第二二聚化多肽是与car或其它同源寡聚体受体连接的ns3a。
101、本公开提供了一种包括本公开的多核苷酸集合的细胞。在一些实施例中，所述细胞是原核细胞。在一些实施例中，所述细胞是酵母细胞。在一些实施例中，所述细胞是哺乳动物细胞。在一些实施例中，所述细胞是人细胞。在一些实施例中，所述细胞是体内的人细胞。在一些实施例中，所述细胞是离体的人细胞。在一些实施例中，所述细胞是干细胞。在一些实施例中，所述细胞是多能干细胞。在一些实施例中，所述细胞是诱导的多能干细胞。在一些实施例中，所述细胞是造血干细胞。
102、本公开提供了一种影响干细胞分化的方法，所述方法包括使用本公开的多核苷酸集合的多肽集合修饰干细胞。在一些实施例中，所述细胞是癌细胞。在一些实施例中，所述细胞是来自被诊断患有癌症的人受试者的非癌细胞。在一些实施例中，所述细胞是免疫细胞。在一些实施例中，所述细胞选自由以下组成的组：白细胞、淋巴细胞、t细胞、调控t细胞、效应子t细胞、cd4 效应子t细胞，cd8 效应子t细胞、记忆t细胞、自身反应性t细胞，衰竭t细胞、自然杀伤t细胞、b细胞、树突状细胞和巨噬细胞。在一些实施例中，所述细胞选自由以下组成的组：心肌细胞、肺细胞、肌肉细胞、上皮细胞、胰腺细胞、皮肤细胞、cns细胞、神经元、肌细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、肝细胞、肾细胞和神经胶质细胞。
103、本公开提供了一种经基因修饰以表达包括本公开的多核苷酸的car的细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞或ilc细胞。
104、本公开提供了一种生产细胞系，其中所述细胞系的细胞包括本公开的多核苷酸集合。
105、本公开提供了一种从所关注的基因产生所关注的多肽产物的方法，所述方法包括：(a)使用根据权利要求1至38中任一项所述的多核苷酸集合修饰细胞系以产生生产细胞系；以及(b)培养所述生产细胞系以产生所述所关注的产物。在一些实施例中，所述所关注的多肽产物包括治疗性蛋白质或肽。在一些实施例中，所述所关注的多肽产物包括病毒。在一些实施例中，所述病毒选自由以下组成的组：腺病毒、慢病毒、杆状病毒、爱泼斯坦·巴尔病毒(epstein barr virus)、乳多空病毒、痘苗病毒、疱疹病毒、单纯疱疹病毒、逆转录病毒和腺相关病毒(aav)。
106、本公开提供了一种生产细胞系，其中所述细胞系的细胞产生本公开的多核苷酸集合。
107、本公开提供了一种生产细胞系，其中所述细胞系的细胞产生包装在病毒衣壳中的本公开的多核苷酸集合。在一些实施例中，所述病毒衣壳选自由以下的衣壳组成的组：腺病毒、慢病毒、杆状病毒、爱泼斯坦·巴尔病毒、乳多空病毒、痘苗病毒、疱疹病毒、单纯疱疹病毒、逆转录病毒和腺相关病毒(aav)。
108、本公开提供了一种病毒衣壳，所述病毒衣壳包括本公开的多核苷酸集合的多核苷酸集合。在一些实施例中，所述病毒衣壳选自由以下的衣壳组成的组：腺病毒、慢病毒、杆状病毒、爱泼斯坦·巴尔病毒、乳多空病毒、痘苗病毒、疱疹病毒、单纯疱疹病毒、逆转录病毒和腺相关病毒(aav)。
109、本公开提供了一种产生本公开的病毒衣壳的细胞。在一些实施例中，所述病毒衣壳选自由以下的衣壳组成的组：腺病毒、慢病毒、杆状病毒、爱泼斯坦·巴尔病毒、乳多空病毒、痘苗病毒、疱疹病毒、单纯疱疹病毒、逆转录病毒和腺相关病毒(aav)。
110、本公开提供了一种包括本公开的多核苷酸集合的组合物。
111、本公开提供了本公开的组合物用于治疗需要car疗法的受试者的用途。
112、本公开提供了包括本公开的多核苷酸集合的试剂盒。
113、本公开提供了一种制备工程化细胞的方法，所述方法包括将本公开的任一个多核苷酸集合的多核苷酸转染到细胞中。在一些实施例中，所述嵌合多肽在细胞中表达。在一些实施例中，所述方法进一步包括在需要的受试者体内施用所述细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用所述小分子。
114、本公开提供了一种控制有需要的受试者体内的t细胞介导的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的细胞的本公开的细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞。在一些实施例中，所述细胞是自体t细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用本公开的小分子。
115、本公开提供了一种刺激对受试者体内的靶细胞群体或组织的t细胞介导的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的细胞的本公开的细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞。在一些实施例中，所述细胞是自体t细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用本公开的小分子。
116、本公开提供了一种在有需要的受试者体内提供抗肿瘤免疫的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的细胞的本公开的细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞。在一些实施例中，所述细胞是自体t细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用本公开的小分子。
117、本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本公开的细胞的本公开的细胞。在一些实施例中，所述细胞是t细胞。在一些实施例中，所述细胞是自体t细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用本公开的小分子。