背景技术：
：：0、2.
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：1、神经退行性疾病(并且特别是导致认知损害和痴呆的神经退行性疾病)是患者、其家庭和社会的严重负担。据计算，在2017年在美国，阿尔茨海默病(alzheimer’s disease)和其他痴呆已损失255万残疾调整生命年(disability-adjusted life-year，daly)。参见“burden of neurological disorders across the us from 1990-2017,”jamaneurol.78(2):165-176(2021)。随人口中位数年龄的提高，预计该负担也提高。2、尽管需要有效的治疗，但是尚未证明能够减慢神经退行性疾病(特别是导致认知损害和痴呆的退行性疾病)进展的疾病修正治疗(disease-modifying treatment)是有效的。另外，患有认知损害的患者对于必须长期施用和/或使用患者控制的装置进行施用的治疗存在依从性挑战。需要肠胃外施用的治疗造成了另外的障碍。因此，需要能够减慢神经退行性疾病(特别是导致认知损害和痴呆的退行性疾病)进展的疾病修正治疗，并且其可以经口施用。3、3.发明概述4、长期以来已知的是，载脂蛋白e基因的ε4等位基因(ε4allele of theapolipoprotein e gene，apoe4)是迟发性阿尔茨海默病(ad)的风险因素。虽然该基因型提高ad风险的机制仍然不清楚，但这种关联的强度使脂蛋白代谢成为ad病理学的核心。5、先前已表明奥比塞曲匹(obicetrapib)(胆固醇酯酶转运蛋白(cholesterolesterase transfer protein，cetp)的强效抑制剂)提高血浆中的hdl水平和apoe水平。我们现在已表明奥比塞曲匹穿过血脑屏障，在经口施用之后具有显著的cns积累。使用经进一步改造以表达人cetp的阿尔茨海默病转基因小鼠模型，我们表明了奥比塞曲匹降低在认知测试的表现中的衰退，并且在脑的可溶性部分中降低aβ片段的浓度。6、因此，提供了用于在患有神经退行性疾病或处于发生神经退行性疾病风险中的对象中减慢神经退行性疾病进展的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的奥比塞曲匹或其可药用盐。7、在一些实施方案中，奥比塞曲匹或其盐经口施用。在多个实施方案中，奥比塞曲匹每日施用一次。在某些实施方案中，所述剂量为每日一次口服(po qd)5至25mg奥比塞曲匹或其盐，例如每日一次口服5mg、每日一次口服10mg、每日一次口服15mg、每日一次口服20mg或每日一次口服25mg。8、在一些实施方案中，奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少8周、至少6个月、至少12个月或至少24个月。9、在一些实施方案中，所述对象已被诊断为患有以下或处于以下风险中：阿尔茨海默病(ad)、路易体痴呆(lewy body dementia)、血管性或多发梗死性痴呆、或者额颞痴呆(frontotemporal dementia，ftd)。在一些特定实施方案中，所述对象已被诊断为患有ad或处于发生ad的风险中。在一些具体实施方案中，所述对象已被诊断为患有ad。在某些实施方案中，所述对象具有至少一个apoe4等位基因或两个apoe4等位基因。在一些具体实施方案中，所述方法包括在所述对象中检测apoe4等位基因的先前步骤。10、在一些实施方案中，所述对象已被诊断为患有轻度认知损害(mild cognitiveimpairment，mci)。11、在一些实施方案中，与未患有神经退行性疾病和未处于神经退行性疾病的升高的风险中的健康对照群体相比，所述对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平降低，(ii)血浆中aβ40水平提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比降低，(iv)血浆中神经丝轻链(neurofilament light，nfl)水平提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平提高。12、在一些实施方案中，与未患有神经退行性疾病和未处于神经退行性疾病的升高的风险中的健康对照群体相比，所述对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平降低，(ii)csf中aβ40水平提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平提高。13、在一些实施方案中，所述对象在治疗之前已基于tau pet成像被确为定具有异常的tau模式。14、在一些实施方案中，与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平进一步降低，15、(ii)血浆中aβ40水平进一步提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平进一步提高。16、在一些实施方案中，与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平进一步降低，17、(ii)csf中aβ40水平进一步提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平进一步提高。18、在一些典型实施方案中，奥比塞曲匹作为片剂施用。在某些实施方案中，所述片剂包含作为钙盐形式的奥比塞曲匹。19、4.附图简述20、图1是转基因小鼠实验的时间线的视觉描述。21、图2a和图2b是示出了以下的条形图：cetp转基因小鼠和hcetp/app(amyloidprecursor protein(淀粉样前体蛋白))双转基因小鼠产生人cetp，以及在这些转基因小鼠中腹膜内施用30mg/kg奥比塞曲匹对cetp活性的作用。数据表明，与缺乏cetp的野生型小鼠相比，载剂注射的转基因小鼠表现出cetp活性。数据还表明在奥比塞曲匹处理组中，cetp活性被抑制。22、图3a至b提供了来自筑巢(nest building)认知表现测试的结果。图3a是在多种条件下对在小鼠中筑巢的影响的视觉显示。图3b是以5分量表对图3a中成像的筑巢能力进行量化的条形图。数据表明，饲喂含胆固醇饮食的hcetp/app转基因小鼠当用载剂(阴性对照)处理时显示出在该认知测试的表现降低，并且奥比塞曲匹的施用降低了这种年龄相关的认知衰退。23、图4a至c示出了使用elisa分析的量化存在于tbs可溶性脑提取物中的淀粉样β(amyloid-beta，aβ)肽的条形图。数据表明，奥比塞曲匹降低了aβ产生，尤其是在hcetp/app双转基因组中。app转基因小鼠也显示出aβ产生降低。24、5.发明详述25、5.1.定义26、除非另有定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语均具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。27、术语“对象”或“个体”可互换使用，并且是指待治疗/处理的动物，包括但不限于人和非人灵长类、啮齿动物(包括大鼠和小鼠)、牛、马、绵羊、猫科和犬科。28、术语“患者”是指人对象。29、术语“治疗”及其变化形式以临床领域中理解的最广泛含义使用。因此，该术语不需要疾病的治愈或完全缓解，并且涵盖获得任何临床上期望的药理学和/或生理学作用。30、短语“治疗有效量”是指当向对象施用用于治疗疾病、病症或障碍时，足以实现所述疾病、病症或障碍的治疗的化合物的量。31、术语“可药用盐”是指用于向对象施用的可接受的盐。可药用盐的实例包括但不限于：无机酸盐(例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐和硝酸盐)；磺酸盐(例如甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和三氟甲磺酸盐)；有机酸盐(例如草酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苯甲酸盐、扁桃酸盐、抗坏血酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐和苹果酸盐)；氨基酸盐(例如甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐和天冬氨酸盐)；无机盐(例如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐)，以及含有机碱的盐(例如铵盐、三乙胺盐、二异丙胺盐和环己胺盐)。如本文所使用的术语“盐”涵盖水合物盐。药学上的盐的另一些实例包括与合适的阳离子复合的本公开内容的化合物的阴离子。32、5.2.另一些解释性惯例33、范围：在整个本公开内容中，本发明的多个方面以范围形式呈现。范围包括所记载端点。应理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应该被解释为对本发明范围的不可改变的限制。因此，应该认为范围的描述已经具体公开了该范围内的所有可能的子范围以及单独的数值。例如，如1至6的范围的描述应当被认为具有具体公开的该范围内的子范围，例如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及单独的数值，例如1、2、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度如何，这都适用。34、在本公开内容中，“包含”、“含有”、“具有”、“包括”及其变化形式具有在美国专利法中赋予它们的含义，允许存在除明确记载那些之外的另外的组分。35、除非特别说明或从上下文中另外显而易见的，否则如本文所使用的术语“或/或者”应理解为包括性的。36、除非特别说明或从上下文中显而易见的，否则如本文所使用的没有数量词修饰的名词应理解为单数或复数。如本文中所使用的没有数量词修饰的名词用于指一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)语法对象。举例来说，“要素”意指一个/种要素或多于一个/种要素。37、除非特别说明或从上下文中另外显而易见的，否则如本文所使用的术语“约”应理解为在本领域正常容差范围内。除非另有说明，否则“约”是指所述值的±10％。当提供关于组合物中组分或物质的量的百分比时，该百分比应理解为基于重量的百分比，除非另有说明或从上下文中理解。38、除非明确指出具体的立体化学，否则预期了化合物的所有手性、非对映体和外消旋形式。因此，本文中所述的化合物包括在任何或所有非对称原子上富集或拆分的旋光异构体，如从描述中显而易见的。可分离或合成r-对映体和s-对映体的外消旋混合物、以及包含r-对映体和s-对映体的对映体富集的立体异构混合物、以及单独的旋光异构体，以便基本上不含它们的对映体或非对映体配偶体，并且这些立体异构体均在本技术的范围内。39、5.3.实验观察的总结40、奥比塞曲匹(以前称为ta-8995)是胆固醇酯转运蛋白(cholesterol estertransfer protein，cetp)的强效抑制剂。41、现在我们已表明，奥比塞曲匹穿过血脑屏障，在经口施用后具有显著的cns积累。使用经进一步改造以表达人cetp的阿尔茨海默病的转基因小鼠模型，我们表明了奥比塞曲匹的施用阻止认知功能的丧失，并在脑的可溶性部分中降低aβ片段的浓度。42、5.4.治疗方法43、因此，在第一方面中，提供了用于在患有神经退行性疾病或处于发生神经退行性疾病风险中的对象中减慢神经退行性疾病进展的方法。所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的奥比塞曲匹或其可药用盐。44、5.4.1.奥比塞曲匹45、奥比塞曲匹(以前称为ta-8995)是式(i)化合物：46、47、(2r,4s){[3,5双(三氟甲基)苄基]-[5(3-羧基丙氧基)嘧啶-2-基]氨基}-2-乙基48、-6-三氟甲基-3,4-二氢-2h-喹啉-1-羧酸乙酯合成奥比塞曲匹的方法是已知的。参见例如，美国专利no.7,872,126；8,084,611和10,112,904，其公开内容通过引用整体并入本文。49、5.4.2.神经退行性疾病50、在一些实施方案中，所述对象已被诊断为患有以下或处于以下的风险中：阿尔茨海默病(ad)、路易体痴呆、血管性或多发梗死性痴呆、或者额颞痴呆(ftd)。51、在某些实施方案中，所述对象已被诊断为患有ad或处于发生ad的风险中。52、在某些实施方案中，对象已被诊断为患有ad。在一些具体实施方案中，对象已基于nia-aa研究框架(nia-aa research framework)标准，采用基于以下的a t n 或a t n-的生物标志物分类被诊断为患有ad：(i)与ad一致的csf谱(aβ42浓度<1000pg/ml且p-tau>19pg/ml，和/或(ii)p-tau/aβ42的比率≥0.024)。在一些具体实施方案中，生物标志物通过elecsys测定来测量。53、在某些实施方案中，对象已基于记录的淀粉样蛋白正电子发射断层显像(positron emission tomography，pet)扫描证据被诊断为患有ad。在某些实施方案中，对象处于ad临床3期或4期。在一些具体实施方案中，对象基于以下nia-aa研究框架标准处于ad临床3期或4期：(i)简易精神状态检查(mini-mental state examination，mmse)评分>20(包含端值)，和/或临床痴呆评定量表-盒之和(clinical dementia rating scale-sum ofboxes，cdr-sb)总评分≥0.5且≤1，且记忆盒评分(memory box score)≥1.0。54、在某些实施方案中，对象处于发生ad的风险中。在一些特定实施方案中，对象具有至少一个apoe4等位基因。在一些特定实施方案中，对象具有两个apoe4等位基因。在一些实施方案中，所述方法还包括在对象中检测apoe4等位基因的存在的先前步骤。55、在一些实施方案中，对象已被诊断为患有轻度认知损害(mci)。在某些实施方案中，mci的诊断使用精神状态简短测试(short test of mental status)、蒙特利尔认知评估(montreal cognitive assessment，moca)或简易精神状态检查(mmse)来进行。56、在多个实施方案中，与未患有神经退行性疾病的健康对照群体相比，对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平降低，(ii)血浆中aβ40水平提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比降低，57、(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平提高。58、在多个实施方案中，与未患有神经退行性疾病和未处于神经退行性疾病的升高的风险中的健康对照群体相比，对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平降低，(ii)csf中aβ40水平提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平提高。59、在多个实施方案中，对象在治疗之前已基于tau pet成像被确定为具有异常的tau模式。60、5.4.3.剂量方案61、在多个实施方案中，奥比塞曲匹或其盐经口施用。在一些典型实施方案中，奥比塞曲匹作为用于经口施用的片剂来施用。在多个实施方案中，奥比塞曲匹或其盐的剂量为经口2.5至25mg/天(每日一次口服2.5至25mg)。在一些实施方案中，奥比塞曲匹或其盐的剂量为经口5至20mg/天(每日一次口服5至20mg)。在一些实施方案中，奥比塞曲匹或其盐的剂量为经口10至20mg/天(每日一次口服10至20mg)。在一些具体实施方案中，每日剂量为每日一次口服2.5mg、每日一次口服5mg、每日一次口服10mg、每日一次口服15mg、每日一次口服20mg或每日一次口服25mg。在多个实施方案中，剂量每日施用一次。在一些实施方案中，剂量是分开的，并且施用2.5至25mg总每日剂量、或5至20mg总每日剂量、或10至20mg总每日剂量作为多个分开的剂量。62、在多个实施方案中，奥比塞曲匹作为片剂施用。在一些实施方案中，片剂包含2.5mg、5mg、7.5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的奥比塞曲匹或其可药用盐。在一些实施方案中，片剂包含作为钙盐形式的奥比塞曲匹。在一些特定实施方案中，片剂包含5mg作为钙盐形式的奥比塞曲匹。63、在一些具体实施方案中，片剂是圆形、直径6mm、白色膜包衣片剂，包含5mg作为钙盐形式的奥比塞曲匹。在一些具体实施方案中，片剂是圆形、直径6mm、白色膜包衣片剂，包含10mg作为钙盐形式的奥比塞曲匹。在一些具体实施方案中，片剂核芯中存在的赋形剂是微晶纤维素、甘露糖醇、淀粉乙醇酸钠、胶体二氧化硅和硬脂酸镁。在一些具体实施方案中，市售膜包衣制剂(opadry ii white,ex colorcon)应用于核芯。64、在多个实施方案中，奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少8周、至少6个月、至少12个月、至少24个月或至少36个月。65、5.5.另一些实施方案66、5.5.1.剂量方案67、在多个实施方案中，与在治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其可药用盐以有效提高血液中总apoe-hdl水平的量施用。在一些典型实施方案中，apoe-hdl的血液水平在血浆中测量。在一些优选实施方案中，奥比塞曲匹或其盐以有效提高缺乏apoc3的颗粒中apoe-hdl的血浆水平和/或缺乏apoc3的hdl颗粒中血浆hdl-apoe的百分比的量施用。68、5.5.2.临床终点69、在多个实施方案中，与治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平进一步降低，(ii)血浆中aβ40水平进一步提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平进一步提高。70、在多个实施方案中，与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平进一步降低，(ii)csf中aβ40水平进一步提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平进一步提高。71、5.5.3.另一些编号的实施方案72、1.在患有神经退行性疾病或处于发生神经退行性疾病风险中的对象中减慢神经退行性疾病进展的方法，其包括：73、向所述对象施用治疗有效量的奥比塞曲匹或其可药用盐。74、2.实施方案1所述的方法，其中所述量有效提高血液中总apoe hdl的水平。75、3.实施方案1或实施方案2所述的方法，其中所述量有效提高血液中apoe-hdl的水平。76、4.实施方案3所述的方法，其中所述量有效提高血液中缺乏apoc3的颗粒中apoe-hdl的水平。77、5.实施方案1至4中任一项所述的方法，其中奥比塞曲匹或其盐经口施用。78、6.实施方案5所述的方法，其中奥比塞曲匹每日施用一次。79、7.实施方案6所述的方法，其中剂量为每日一次口服5至20mg奥比塞曲匹或其盐。80、8.实施方案7所述的方法，其中所述剂量为每日一次口服5mg。81、9.实施方案7所述的方法，其中所述剂量为每日一次口服10mg。82、10.实施方案7所述的方法，其中所述剂量为每日一次口服15mg。83、11.实施方案7所述的方法，其中所述剂量为每日一次口服20mg。84、12.实施方案7至11中任一项所述的方法，其中奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少8周。85、13.实施方案12所述的方法，其中奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少6个月。86、14.实施方案13所述的方法，其中奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少12个月。87、15.实施方案14所述的方法，其中奥比塞曲匹或其盐每天一次施用至少24个月。88、16.实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断为患有以下或处于以下的风险中：阿尔茨海默病(ad)、路易体痴呆、血管性或多发梗死性痴呆、或者额颞痴呆(ftd)。89、17.实施方案16所述的方法，其中所述对象已被诊断为患有ad或处于发生ad的风险中。90、18.实施方案17所述的方法，其中所述对象已被诊断为患有ad。91、19.实施方案17或实施方案18所述的方法，其中所述对象具有至少一个apoe4等位基因。92、20.实施方案19所述的方法，其中所述对象具有两个apoe4等位基因。93、21.实施方案19至20中任一项所述的方法，其还包括在所述对象中检测apoe4等位基因的先前步骤。94、22.实施方案1至21中任一项所述的方法，其中所述对象已被诊断为患有轻度认知损害(mci)。95、23.实施方案1至22中任一项所述的方法，其中与未患有神经退行性疾病和未处于神经退行性疾病的升高的风险中的健康对照群体相比，所述对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平降低，(ii)血浆中aβ40水平提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比降低，(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平提高。96、24.实施方案1至23中任一项所述的方法，其中与未患有神经退行性疾病和未处于神经退行性疾病的升高的风险中的健康对照群体相比，所述对象在治疗之前已被确定为具有以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平降低，(ii)csf中aβ40水平提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平提高。97、25.实施方案1至24中任一项所述的方法，其中所述对象在治疗之前已基于taupet成像被确定为具有异常的tau模式。98、26.实施方案1至25中任一项所述的方法，其中与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平进一步降低，(ii)血浆中aβ40水平进一步提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平进一步提高。99、27.实施方案1至26中任一项所述的方法，其中与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹或其盐的剂量足以阻止以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平进一步降低，(ii)csf中aβ40水平进一步提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平进一步提高。100、28.实施方案1至27中任一项所述的方法，其中奥比塞曲匹作为片剂施用。101、9.实施方案28所述的方法，其中所述片剂包含作为钙盐形式的奥比塞曲匹。102、30.实施方案28或29所述的方法，其中所述片剂包含一种或更多种赋形剂。103、31.实施方案30所述的片剂，其中所述一种或更多种赋形剂包含微晶纤维素、甘露糖醇、淀粉乙醇酸钠、胶体二氧化硅和硬脂酸镁、或其组合。104、6.实施例105、6.1实施例1：定性的全身分析表明奥比塞曲匹穿过血脑屏障106、为了确定奥比塞曲匹和/或其给药后代谢物的组织分布，并且特别是为了确定在脑组织中的分布，我们采用了利用放射性标记的[14c]-奥比塞曲匹和定量的全身技术。107、将小鼠维持在温度为19至25℃且相对湿度为40％至70％的室内，并且将其每天暴露于荧光灯下(标称12小时)。允许它们自由获取西式饮食(含有15％可可脂、1％玉米油和40.5蔗糖的半合成改良饮食)。将等数目的雄性小鼠(n＝5)和雌性小鼠(n＝5)以5g/kg的[14c]-奥比塞曲匹通过管饲法给予单次施用。从给药时间起1小时、4小时、24小时、72小时和168小时时将小鼠人道地处死，随后取回血液和组织样品。108、使用血浆作为参考点，数据(参见下表1至4)表明在给药后1小时的雌性小鼠中，脑组织中[14c]-奥比塞曲匹的浓度为血浆中浓度的约4％。在4小时标记处，该相对浓度显著升高至血浆中浓度的约16％。具体地，在脑脉络丛中，发现放射性标记的药物产物的浓度几乎为血浆浓度的50％。同样值得注意的是，在小脑中观察到的相对浓度几乎为17％。与雌性小鼠相比，雄性对应者在脑中表现出相似的总浓度，而在小脑中显示出略低的浓度。这些数据表明，在经口给药5g/kg之后4小时时，奥比塞曲匹显著分布到脑中。109、110、111、112、113、6.2.实施例2：用于预防阿尔茨海默病(ad)的cetp抑制剂奥比塞曲匹的临床前评估114、6.2.1.研究方法115、为了评估奥比塞曲匹减慢阿尔茨海默病(ad)的发作和/或进展的潜在效力，我们进行了以下临床前小鼠实验。116、小鼠不表达cetp。因此，用于该试验的小鼠品系包括在人内源性启动子控制下表达人cetp的cetp转基因小鼠品系(b6.cba-tg(cetp)5203tall/j,jackson labs)。该启动子对饮食胆固醇摄入敏感，因此当用1％(w/w)高胆固醇饮食饲喂这些小鼠时，所述小鼠显示出cetp表达提高。117、在本试验中还使用了app tg小鼠品系mcgill-thy1-app-cuello-tg。在鼠thy1.2启动子的控制下，mcgill-thy1-app转基因大鼠表达具有瑞典和印第安纳突变的人app751。这些大鼠是现有app转基因大鼠系中研究最广泛的。纯合动物显示出淀粉样斑块的年龄依赖性积累、神经胶质增生、胆碱能突触丧失和认知损害。参见petrasek et al.,front.aging neurosci.,vol.10,article 250(2018)。118、每个系的转基因均维持杂合。对于进入试验的小鼠的产生，使cetp tg雌性或雄性分别与app tg雄性或雌性繁育。后代包括野生型、仅cetp tg、仅app tg和hcetp/app tg基因型，使得进入试验的所有小鼠均为同窝出生小鼠(littermate)(图1)。随意提供食物和饮水，且昼/夜光周期为12小时。119、按标准饮食饲养和维持小鼠。在12周龄时，将小鼠置于1％(w/w)胆固醇饮食(研究饮食)以诱导cetp表达，并同时通过腹膜内注射接受奥比塞曲匹(剂量30mg/kg)或载剂对照。将奥比塞曲匹溶解于30％korliphor(#c5135millipore sigma)和60％等张葡萄糖溶液的混合物中，进行温热所述溶液与在超声水浴中溶解粉末的重复循环。当小鼠达到24周龄时，试验结束，使得小鼠对胆固醇饮食和处理的总暴露总计为长至12周(图1)。然后将小鼠处死，并收集多种组织提取物。120、121、wt＝野生型；cetp＝胆固醇酯转运蛋白；tg＝转基因；app＝淀粉样前体蛋白；dtg＝双转基因。122、为了确定该药物到达其靶标，在腹膜内注射之后4小时和24小时时从小鼠中采集血液。在此之后，使用roar biomedical inc.荧光cetp活性测定(产品no.rb-cetp)如下来测量cetp活性：将1微升稀释度为1:15的小鼠血浆与0.3μl供体和0.3μl接受体颗粒在30μl反应缓冲液中孵育。在水浴中在37℃下孵育3小时时间之后测量荧光。结果表明，在给药后4小时以及给药后24小时，奥比塞曲匹均有效抑制了小鼠血浆中的人cetp(图2)。123、6.2.2.奥比塞曲匹在hcetp/app双转基因小鼠中降低认知表现的恶化124、筑巢是小鼠为了保存能量、躲藏和交配的自然行为。认知完整的小鼠建造合格的巢。已表明这种筑巢现象对海马破坏敏感；无能力筑巢表明认知下降。125、在试验期的最后一周期间(第23至24周)，将每只小鼠置于干净的笼中持续10至12小时，且具有2.0至2.5克垫料(bedding material)以及随意的食物和水。第二天早上按照5分量表对巢的质量进行评估。数据表明，关于载剂的野生型小鼠、关于奥比塞曲匹的野生型小鼠、关于载剂的cetp小鼠和关于奥比塞曲匹的cetp小鼠显示出大约等同的筑巢行为。相比之下，关于载剂的app小鼠、关于奥比塞曲匹的app小鼠和关于载剂的hcetp/app双转基因小鼠在其筑巢的能力方面显示出极大的破坏。然而，用奥比塞曲匹给药的hcetp/app双转基因小鼠保留了构建巢的能力，表明奥比塞曲匹在hcetp/app双转基因小鼠中降低了认知下降(图3a至b)。126、6.2.3.奥比塞曲匹在hcetp/app双转基因小鼠的脑中降低可溶性淀粉样蛋白-b片段。通过elisa量化127、在我们的认知分析实验之后，将小鼠处死并收集脑样品。从脑提取物中定量aβ负荷。使用v-plex plus aβpeptide panel 1(6e10)试剂盒(mesoscalediscovery)根据制造商说明来测量aβ负荷。简言之，将平均50mg皮质组织用5×体积的冷组织均质化缓冲液(2mmtris，ph 7.4，250mm蔗糖，0.5mm edta，0.5mm egta，1×蛋白酶抑制剂混合物)进行机械均质化。将所得匀浆在台式离心机(table-top centrifuge)中在4℃下以5000×g离心10分钟。从所得上清液中取出总共180μl，并与180μl dea缓冲液(0.4％dea，0.1m nacl)混合。将来自混合物的200μl转移至新管，并在4℃下以120000×g离心1小时。将150μl上清液用16μl0.5m tris-hc1,ph 6.8缓冲液中和，得到可溶性dea提取物。将沉淀物在125μl冷的70％甲酸(formic acid，fa)中在冰上解离30分钟，随后在4℃下以120000×g离心1小时。将105μl上清液用1400μl中和缓冲液(1m tris碱，0.5m na3hpo4，0.05％nan3)中和，得到fa可溶性提取物。将25μl的可溶性dea提取物和fa提取物用于elisa。128、在图4中，相对于野生型，app单转基因小鼠和hcetp/app双转基因小鼠表现出更高的aβ负荷。数据还表明，奥比塞曲匹在两种转基因小鼠模型中均降低了aβ负荷，其中在hcetp/app双转基因小鼠中观察到更高的降低。129、6.3.实施例3：安慰剂对照、双盲、随机、2期剂量探索研究，以确定奥比塞曲匹作为高强度他汀类治疗的辅助物(adjunct)的作用130、6.3.1.研究设计总结131、进行随机、安慰剂对照、双盲、2期剂量探索研究(rose试验，nct04753606)，以确定奥比塞曲匹作为高强度他汀类治疗的辅助物的效力、安全性和耐受性。132、6.3.2.具体目的133、本研究的主要目的是确定以下：与安慰剂相比，在第56天，奥比塞曲匹作为高强度他汀类治疗的辅助物在降低低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoproteincholesterol，ldl-c)方面的效力。134、6.3.3.治疗期135、在筛选访视之后长至2周，参与者在第1天(访视2)返回现场(site)，并确定研究资格，然后随机化并开始治疗。约114名符合条件的参与者(每个治疗组38名参与者)以1:1:1之比被随机分至以下治疗组之一：136、·5mg奥比塞曲匹(一枚5mg奥比塞曲匹片剂 1枚安慰剂片剂)；137、·10mg奥比塞曲匹(两枚5mg奥比塞曲匹片剂)；或者138、·安慰剂(2枚安慰剂片剂)。139、在8周治疗期期间，在第1天至第56天，向参与者经口施用指定的研究药物，每天一次。参与者每4周返回现场，以进行效力、安全性和药物代谢动力学(pharmacokinetic，pk)评估。参与者、研究者、临床研究组织(clinical research organization，cro)和主办者通过数据库锁定对第一名参与者从第1天(访视2)起的所有脂质结果不知情，以保护对治疗分配的不知情性。140、6.3.4.安全性随访期141、在治疗期结束之后约4周，参与者返回现场进行安全性随访访视(访视5)，以进行安全性和pk评估。142、6.3.5.药物代谢动力学期143、参与者分别在治疗期结束之后约8周和15周返回现场进行两次pk访视(访视6和访视7)，以进行安全性和pk评估。144、6.3.6.纳入标准145、符合所有以下标准的参与者有资格参与本研究：146、1.了解研究过程，愿意遵守研究计划，并且在筛选操作之前通过给予书面知情同意书同意参与研究；147、2.在筛选访视时年龄为18至75岁(包含端值)的男性或女性；148、·女性如果满足所有3项以下标准则可被纳入：149、i.她们未妊娠；150、ii.她们未母乳哺育；以及151、iii.她们确实计划在研究期间妊娠；152、·具有生育潜力的女性在筛选访视时必须进行阴性尿妊娠测试。注：如果女性满足如由研究者记录的以下标准中的1者，则不认为她们具有生育潜力：153、i.她们在签署icf之前至少1个周期进行了子宫切除术或输卵管结扎术；或者154、ii.她们是绝经后的，其被定义为：对于年龄≥55岁的女性，自其最后一次月经期起≥1年，或者对于年龄＜55岁的女性，自其最后一次月经期起≥1年且卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，fsh)水平在绝经后范围内；以及155、·具有生育潜力的女性必须同意从筛选至最后一次访视之后90天内使用避免妊娠的有效方法。其伴侣具有生育潜力的男性必须已同意从筛选至最后一次访视之后90天内使用避免妊娠的有效方法。避免妊娠的有效方法是始终且正确地使用pearl指数<1的避孕方法(包括可植入避孕药、可注射避孕药、经口避孕药、经皮避孕药、宫内节育器、具有杀精子剂的隔膜、具有杀精子剂的男性或女性避孕套、或宫颈帽)或者不育性伴侣；3.在筛选访视时禁食ldl-c水平>70mg/dl且tg水平<400mg/dl；以及156、4.在筛选之前目前正在接受稳定剂量的高强度他汀类治疗(阿托伐他汀(atorvastatin)40mg/天或80mg/天，或瑞舒伐他汀(rosuvastatin)20mg/天或40mg/天)持续8周，并旨在整个研究期间保持相同稳定的剂量。157、6.3.7.排除标准158、符合任一以下标准的参与者被排除在本研究之外：159、1.在筛选访视时体重指数≥40kg/m2；160、2.目前具有临床意义的cv疾病，包括但不限于：161、a.在随机化之前3个月内的主要不良cv事件；或者162、b.纽约心脏协会功能分级(new york heart associationfunctionalclassification)iii级或iv级心力衰竭；163、3.在筛选访视时糖基化血红蛋白(hba1c)≥10％；164、4.不受控的高血压，即坐位收缩血压>160mmhg和/或坐位舒张血压>90mmhg。允许进行一次重新测试，此时如果重新测试结果不再具有排除性，则参与者可以被随机化；165、活动性肌肉疾病或持续性肌酸激酶浓度>3×正常上限(upper limit of normal，uln)。在1周之后允许进行一次重新测试以验证结果，此时如果重新测试结果不再具有排除性，则参与者可以被随机化；166、使用慢性肾病流行病学协作(chronic kidney disease epidemiologycollaboration)等式计算的估计肾小球滤过率<60ml/分钟；167、如通过如下任一实验室异常表明的肝功能障碍：γ-谷氨酰转移酶、丙氨酸转氨酶或天冬氨酸转氨酶>2×uln，或总胆红素>1.5×uln；168、贫血，其被定义为对于男性，血红蛋白浓度<11g/dl，对于女性，血红蛋白浓度<9g/dl；169、在筛选之前5年内具有恶性病病史，而非黑素瘤皮肤癌除外；170、在筛选之前5年内具有酒精和/或药物滥用史；171、在筛选之前，在30天或5个半衰期(以较长者为准)内用另一些研究产品或装置进行治疗；172、在随机化之前10周内用任何蛋白质原转换酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型(proprotein convertase subtilisin kexin type 9，pcsk9)抑制剂进行治疗，或者在随机化之前2周内用贝派地酸(bempedoic acid)进行治疗；173、研究者认为会妨碍参与研究的任何其他临床上显著的非心脏疾病或病症的证据；或者174、已知的cetp抑制剂变态反应或不耐受。175、6.3.8.重新测试176、如果研究者认为在筛选期间的实验室异常是暂时的，则可在筛选期间重复一次实验室测试。记录研究者进行重新测试的理由。如果重新测试结果不再具有排除性，则参与者可以被随机化。177、6.3.9.重新筛选178、经筛选且不满足研究资格标准的参与者在主办者和/或医学监测者商讨和批准后被考虑进行重新筛选。重新筛选的参与者被分配了新的参与者编号。重新筛选发生在最后一次筛选访视之后不少于5天。179、6.3.10.退出标准180、参与本研究可因以下原因中的任一者而中止：181、1.参与者因任何原因撤回同意或要求中止研究；182、2.发生使参与者暴露于重大风险和/或不允许参与者遵守方案要求的任何医学病症或情况；183、3.任何sae、临床上显著的ae、严重实验室异常、并发疾病或其他向研究者指示继续参与不符合参与者的最佳利益的医学病症；184、4.妊娠；185、5.禁止伴随用药的要求；186、6.参与者未能遵守方案要求或研究相关程序；或者187、7.主办者或监管机构终止研究。188、除非参与者撤回同意，否则鼓励提前中止研究药物的参与者立即完成为提前终止访视安排的整组的评估，并且在最后一次给药之后4周完成安全性随访访视。如果由于上述标准或任何其他原因参与者提前退出研究，则他们应尽一切努力完成为提前终止访视安排的整组的评估，并且在最后一次给药之后4周完成安全性随访访视。对于未经撤回同意而提前中止研究药物的参与者或者对于提前从本研究退出的参与者，在安全性随访访视期间不收集pk样品。参与者退出的原因被记录在电子病例报告表(electronic case reportform，ecrf)中。189、在参与者失随访的情况下，将尝试联系参与者，并记录在参与者的医疗记录中。退出的参与者不会被替换。190、6.3.11.研究治疗191、6.3.11.1治疗组192、将参与者以1:1:1之比随机分至以下治疗组之一：193、1. 5mg奥比塞曲匹(1枚5mg奥比塞曲匹片剂 1枚安慰剂片剂)；194、2. 10mg奥比塞曲匹(2枚5mg奥比塞曲匹片剂)；或者195、3.安慰剂(2枚安慰剂片剂)196、6.3.11.2给药依据197、在先前在健康志愿者和患者中进行的奥比塞曲匹的临床研究中，在5mg奥比塞曲匹剂量水平下观察到接近最大的效果，其中hdl-c水平提高和ldl-c水平降低。在10mg奥比塞曲匹剂量水平下还观察到lp(a)水平相对于基线具有统计学上显著的下降。因此，本研究在目前正在接受高强度他汀类治疗的参与者中使用了5mg和10mg奥比塞曲匹的剂量。198、6.3.11.3随机化和盲法199、满足所有资格标准的参与者被随机分到本研究中。参与者以1:1:1之比随机分至(i)5mg奥比塞曲匹、(ii)10mg奥比塞曲匹或(iii)安慰剂治疗组。在随机化时，参与者根据其筛选访视(访视1)ldl-c水平(≥100或<100mg/dl)进行分层。使用自动化交互式响应技术(interactive response technology，irt)系统将参与者分配至3个治疗组之1。200、参与者、研究者、cro和主办者通过数据库锁定对第一参与者从第1天(访视2)起的所有脂质结果不知情，以便保护对治疗分配的盲性。201、6.3.12.药物供应202、6.3.12.1制剂和包装203、研究药物由5mg奥比塞曲匹片剂和匹配的安慰剂片剂组成。所有研究药物均按照现行良好的生产实践进行制备。204、奥比塞曲匹片剂为圆形、直径6mm、白色膜包衣片剂，且无识别标记、包含5mg的奥比塞曲匹药物物质。还提供了匹配的安慰剂片剂。存在于片剂核芯中的赋形剂是微晶纤维素、甘露糖醇、淀粉乙醇酸钠、胶体二氧化硅和硬脂酸镁。市售膜包衣制剂(opadry iiwhite,ex colorcon)应用于核芯。205、奥比塞曲匹片剂和安慰剂片剂被包装到箔泡罩中，并组装成泡罩卡，为每个治疗组提供研究药物。泡罩卡被清楚地标记以指示每天使用哪些泡罩。片剂在低于25℃(77°f)的环境条件下储存。206、研究者手册中描述了奥比塞曲匹片剂的物理、化学和药物制剂特性和特征。207、所有研究药物均按照所有适用的当地监管要求进行标记。208、6.3.12.2研究药物的制备和分发209、本研究中使用的研究药物如下：210、1.5mg奥比塞曲匹片剂；和211、2.匹配的安慰剂片剂。212、将以上所列研究药物包装以仅提供5mg或10mg奥比塞曲匹或安慰剂的剂量。参与者仅在第1天至第56天随机接受奥比塞曲匹或安慰剂的2个剂量中的1个。213、在每次适当的访视(访视2和访视3)时，参与者接受4个具有适合于参与者治疗组的研究药物的泡罩卡。每个泡罩卡为1周的给药提供足够的供应，且足以提供额外一天的给药，以防参与者需要推迟下一次访视。指示参与者每天从泡罩卡中取出2个单位。泡罩卡被清楚地标记以指示每天使用哪些泡罩。指示参与者在下次访视时将所有未使用的研究药物带到现场。214、6.3.13.研究药物施用215、在第1天至第56天，参与者经口每天一次自行施用两枚研究药物片剂。研究药物在每天早上大约同一时间与食物一起施用。在预定访视的当天，研究药物在所有空腹血液血样之后与食物一起施用。如果参与者忘记在规定日(given day)服用研究药物，则他们将按照正常服用下一剂量，并且不应服用双倍剂量以弥补忘记的剂量。216、6.3.14.治疗依从性217、通过计数未使用的片剂来评价对研究药物方案的依从性。指示参与者在第3次和第4次访视时将所有未使用的研究药物带到现场。在治疗期期间，如果依从性不在80％至120％(包含端值)之间，则告知参与者关于依从性对方案的重要性。如果在2次连续访视中超出限制，则由研究者和主办者决定参与者是否应退出本研究。218、6.3.15.储存和责任性(accountability)219、所有研究药物均储存在低于25℃(77°f)的安全区域中，且仅限于研究者和经授权的现场人员进入。220、根据监管要求，研究者或指定的现场人员记录向参与者分发和/或施用的研究药物的量、由参与者返还的量、以及从主办者(或代表)接收和返还至主办者(或代表)的量(当适用时)。在整个研究过程中保持研究药物的责任性记录。用于该研究的责任性单位(accountability unit)是片剂。差异将被协调或解决。用于未使用的研究药物的最终处置的程序在适当的研究手册中提供。221、6.3.16.既往和伴随的药物和/或程序222、6.3.16.1排除的药物和/或程序223、参与者在筛选之前30天或5个半衰期(以较长者为准)内不得接受用其他研究产品或装置进行的治疗。224、参与者在随机化之前10周内停止服用任何pcsk9抑制剂，或在随机化之前2周内停止服用贝派地酸。225、6.3.16.2允许的药物和/或程序226、目前参与者将在筛选之前接受稳定剂量的高强度他汀类治疗(阿托伐他汀40或80mg/天或者瑞舒伐他汀20或40mg/天)持续8周，并且旨在整个研究期间保持同一稳定剂量。227、6.3.16.3既往和伴随药物使用的记录228、记录在筛选访视之前28天内使用的药物。除研究药物之外施用的任何药物(无论根据方案是否允许)均应记录在伴随药物ecrf上。229、6.3.17.研究程序230、研究程序遵循程序时间表：231、232、covid-19＝冠状病毒病2019；ecg＝心电图；fsh＝卵泡刺激素；hbalc＝糖基化血红蛋白；irt＝交互式响应技术；ldl-c＝低密度脂蛋白胆固醇；pk＝药物代谢动力学；tg＝甘油三酯。233、6.3.18.临床实验室评价234、如在程序时间表中所示获得用于化学和血液学的血液，并将其送至中心实验室以进行分析。特别地，收集以下脂质谱数据：235、载脂蛋白b236、载脂蛋白e(apolipoprotein e，apoe)237、高密度脂蛋白-apoe[1]238、高密度脂蛋白胆固醇239、低密度脂蛋白胆固醇[2]240、非高密度脂蛋白胆固醇241、甘油三酯242、极低密度脂蛋白胆固醇243、[注1]具有或不具有载脂蛋白c3。244、[注2]除非甘油三酯≥400mg/dl或低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)≤50mg/dl，否则使用friedewald方程进行计算；在这两种情况下，ldl-c水平通过制备型超速离心直接测量，也称为β定量。(来源：ldl calculated.mdcalc.https://www.mdcalc.com/ldl-calculated。2020年11月9日访问)。另外，对于所有患者，在基线(访视2)时和在8周治疗期结束(访视4)时，通过制备型超速离心来测量ldl-c，也称为β定量。245、用于化学和血液学的血液样品在禁食条件下(即，在参与者禁食持续约10小时之后)获得。出于本研究的目的，禁食被定义为除了水和任何必需药物之外不经口吃任何东西。如果参与者未禁食，则研究者应尽快重新安排访视。估计肾小球滤过率使用慢性肾病流行病学协作方程进行计算。仅在筛选访视时，化学组(chemistry panel)包括hbalc。246、对于具有生育潜力的女性，在其参与本研究之前在筛选访视时、最后一次pk访视(访视7)和提前终止访视时，进行尿妊娠测试。247、在自其最后一次月经期起≥1年的年龄<55岁的女性中，在参与本研究之前在筛选访视时进行fsh测试。248、如在程序时间表中所示收集用于pk评估的血液样品。在第1天，在给药前收集pk样品。随后的给药后pk样品在每次访视时大约同一时间收集一次。249、6.3.19.体重和身高250、在筛选访视时测量体重和身高，并将其用于计算身体质量指数。体重测量在参与者着室内衣服、且移除鞋子和膀胱排空的情况下进行。251、6.3.20.人口统计学252、在筛选访视时收集参与者的人口统计学数据(例如，性别、种族、民族和出生日期/年份)。253、6.3.21.心电图254、在筛选访视时由研究者或经培训的现场人员进行单一标准12导联ecg，并在当地读取。255、6.3.22.体格检查256、如在上述程序时间表中所示进行体格检查。257、6.3.23.效力评估258、主要效力终点是与安慰剂组相比，每个奥比塞曲匹组从第1天到第56天ldl-c的百分比变化。259、用于脂质谱的血液样品是在禁食条件下(即，在参与者禁食约10小时之后)获得的。出于本研究的目的，禁食被定义为除了水和任何必需药物之外不经口吃任何东西。如果参与者未禁食，则研究者应尽快重新安排访视。除非tg≥400mg/dl或ldl-c≤50mg/dl，否则使用friedewald方程来计算ldl-c水平；在这两种情况下，ldl-c水平均通过制备型超速离心直接测量，也称为β定量。另外，对于所有患者，在基线(访视2)时和在8周治疗期结束(访视4)时，通过制备型超速离心来测量ldl-c，也称为β定量。260、6.3.24.结果261、最近，大型前瞻性病例组群研究表明，在老年人中，较高的全血浆apoe水平和hdl中较高的apoe水平与痴呆或阿尔茨海默病风险的降低无关。然而，在同一研究中，表明缺乏apoc3的hdl中的apoe水平与较好的认知功能和较低的痴呆风险相关。koch et al.,“association of apolipoprotein e in lipoprotein subspecies with risk ofdementia，”jama network open 3(7)：e209250(2020).262、先前已报道奥比塞曲匹(强效cetp抑制剂)提高总血浆apoe水平。263、hovingh et al.，“cholesterol ester transfer protein inhibiton by ta～8995 in patients with mild dyslipidaemia(tulip)：a randomized，double～blind，placebo-controlled phase 2 trial，”lancet 386：452-60(2015)和van cappelleveenet al.，“effects of the cholesteryl ester transfer protein inhibitor，ta-8995，on cholesterol efflux capacity and high-density lipoprotein particlesubclasses，”j.clin.lipidology 10：1137-1144(2016)。264、从未报道过奥比塞曲匹对hdl-apoe以及有和无apoc3的hdl中apoe水平的作用。265、如上所述，rose试验是2期、安慰剂对照、双盲、随机化的临床试验，所述试验在禁食ldl-胆固醇(ldl-c)水平＞70mg/dl的患者(尽管进行了高强度他汀类治疗)中研究了奥比塞曲匹作为高强度他汀类治疗的辅助物的作用。结果显示，在用5mg/天和10mg/天的奥比塞曲匹治疗8周之后，总血浆hdl-apoe水平显著提高(表6)。266、267、提高了缺乏apoc3的血浆hdl颗粒中的apoe，并且提高了缺乏apoc3的颗粒中hdl-apoe的百分比。缺乏apoc3的apoe-hdl的提高，以及缺乏apoc3的颗粒中hdl-apoe的百分比提高，表明在患有神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)或处于神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)风险中的患者中，特别是在具有至少一个apoe4等位基因的对象中，奥比塞曲匹将有效地减慢神经退行性疾病的进展。268、6.4.实施例4：2a期、开放标签、多中心研究，以确定奥比塞曲匹在患有早期阿尔茨海默病的参与者(杂合子/纯合子e4携带者)中的效力和安全性269、6.4.1.研究设计和持续时间270、本研究是在患有早期ad的参与者中的多中心、概念验证、2a期研究，以确定奥比塞曲匹治疗的效力、安全性和耐受性。个体参与者的研究持续时间为约24周(不包括筛选和随访)。271、6.4.2.目的272、本研究的一个目的是确定奥比塞曲匹在患有早期阿尔茨海默病(ad)的对象中对脑脊液(cerebrospinal fluid，csf)中apoa-i、apoe和胆固醇外排能力的水平的作用。另一个目的是确定奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中的安全性和耐受性。另一个目的是确定以下：273、·确定奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中对脂蛋白谱的作用(药效学[pd])。274、·确定奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中对涉及神经退行性变和炎症的生物标志物的作用。275、·确定奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中对另一些pd探索性生物标志物的作用。276、·确定与标准护理相比，奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中延迟疾病进展的效力。277、·确定奥比塞曲匹在患有早期ad的参与者中对认知的效力。278、6.4.3.纳入标准279、符合所有以下标准的参与者有资格参与本研究：280、1.年龄范围：在筛选访视时年龄为50至75岁281、2.绝经后或在其他情况下无生育潜力的男性或女性282、3.基于nia-aa研究框架标准的ad诊断：283、a.基于以下的生物标志物分类a t n 或a t n-：284、i.在第一剂研究药物当天之前，在筛选期期间得到的与ad一致的csf谱(aβ42浓度＜1000pg/ml且p-tau＞19pg/ml，或者p-tau/aβ42之比≥0.024(elecsys测定))，或者285、ii.在先前12个月内获得的与ad一致的csf谱的记录证据，或者286、iii.在先前12个月内获得的记录淀粉样蛋白正电子发射断层显像(pet)扫描证据287、4.基于nia-aa研究框架标准的ad临床3期或4期288、a.在筛选时具有简易精神状态检查(mmse)评分，并且基线>20(包含端值)289、b.临床痴呆评定量表-盒之和(cdr-sb)总体评分≥0.5且≤1，且记忆盒评分≥1.0290、5.能够流利地说、读和写当地语言291、6.具有e4/e4或e3/e4的apoe基因型292、7.患者应是以下两者之中的任一者：293、a.未用任何已批准的针对ad的治疗进行治疗，且根据病程，有理由预期不需要立即进行治疗，并且在研究期间患者不应开始治疗，或者294、b.在基线之前，已批准的针对ad治疗的药物稳定至少3个月。在进入研究之后，ad治疗的剂量应保持相同。295、8.患者和护理同伴愿意同意所有研究程序。296、6.4.4.排除标准297、符合任一以下标准的参与者被排除参与本研究：298、1.除ad之外，可能损害认知的神经或医学病症包括：头部创伤、癫痫发作病症、神经退行性疾病、脑积水、大脑/脊髓血肿、炎性疾病、中枢神经系统感染(例如，脑炎或脑膜炎)、赘生物、毒性暴露、代谢紊乱(包括低氧或低血糖发作)、或内分泌失调、或者据研究者的意见禁止他们参与本研究的任何重大医学病症。299、2.经历磁共振成像(magnetic resonance imaging，mri)的任何禁忌证，如由当地主要研究者(principal investigator，pi)或放射科医师所判断。300、3.指示显著异常的脑mri，所述异常包括但不限于先前出血或梗死>1cm3、>3个腔隙性梗死、对应于fazekas评分为3的深部白质病变、脑挫伤、脑软化、动脉瘤、血管畸形、硬脑膜下血肿、脑积水、占位性病变(例如，脓肿或脑肿瘤例如脑膜瘤)。如果经医学检测者讨论和批准，则可允许小的偶发性脑膜瘤。301、4.以下神经学、精神病学或医学病症中任一者的病史：302、a.大血管卒中病史303、b.在先前12个月内具有心肌梗死或不稳定型心绞痛病史304、c.或者动脉粥样硬化性血管疾病的另一些临床表现305、d.1型糖尿病和不受控的2型糖尿病(血红蛋白alc[hba1c]>8％)306、e.3次单独测定的全身血压>150/90mmhg307、f.醛固酮增多症病史308、g.显著的肾或肝功能障碍309、h.当前或先前乙型肝炎感染(被定义为乙型肝炎表面抗原(hepatitis b surfaceantigen，hbsag)和/或乙型肝炎核心抗体((抗hbc))的阳性测试))。对乙型肝炎具有免疫力的对象(如果由于自然感染，则被定义为阴性hbsag、阳性乙型肝炎抗体[抗hbs]和阳性抗hbc；如果由于疫苗接种，则被定义为阴性hbsag、阴性抗hvc和阳性抗-hbs)有资格参与本研究i.丙型肝炎病毒抗体(抗hcv)病史或在筛选时针对丙型肝炎病毒抗体的阳性测试310、j.人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，hiv)病史或在筛选时针对人免疫缺陷病毒(hiv)的阳性测试311、k.除乳腺癌或子宫颈原位癌、或已完全切除的皮肤基底细胞癌之外，在过去5年内被诊断为患有有转移性潜能的癌症312、l.在先前90天内需要开始药物或住院的重度抑郁发作313、m.出现幻觉或妄想314、n.在筛选的12周内手术315、o.对于女性对象，妊娠或正在进行哺乳。316、5.在筛选时以下实验室异常中的任一者：317、a.临床上显著(如由心脏病学家或当地pi所确定)的12导联ecg异常318、b.在间隔不到2周的2次连续测定中，任何血清化学值(例如天冬氨酸转氨酶[ast]、丙氨酸转氨酶[alt]、碱性磷酸酶、肌酸激酶[ck]、总胆红素等)>2×正常上限(uln)319、c.血清肌酐高于uln或估计肾小球滤过率(estimated glomerular filtrationrate，egfr)<60ml/分钟320、d.血小板计数、国际标准化比率(international normalized ratio，inr)、凝血酶原时间(prothrombin time，pt)或部分凝血活酶时间(partial thromboplastin time，ptt)不在正常范围内，或者存在出血提高或不受控的其他风险321、e.未携带apoe 4等位基因(例如e3/e3；e3/e2；e2/e2)。322、6.如由当地pi所判断存在腰椎穿刺禁忌证。323、7.据研究者的意见，将禁止参与本研究的任何其他重大医学病症，包括无法耐受mri扫描或腰椎穿刺操作。324、8.服用以下药物中的任一者：325、a.抗精神病剂，包括匹莫范色林(pimavanserin)326、b.兴奋剂药物327、c.至少90天剂量不稳定的抗抑郁药物328、d.免疫抑制药物，包括慢性皮质类固醇329、e.经注射或经输注的抗体治疗，包括但不限于针对肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor，tnf)的抗体、抗白介素(il)-6、那他珠单抗(natalizumab)、利妥昔单抗(rituximab)和类似的药剂330、f.胰岛素331、g.抗凝剂或抗血小板药物，包括华法林(warfarin)、类肝素和直接凝血因子抑制剂(例如阿哌沙班(apixaban)、达比加群(dabigatran)、利伐沙班(rivaroxaban))332、以剂量<100mg/天的阿司匹林(aspirin)或以剂量为75mg/天的氯吡格雷(clopidogrel)，但不允许二者组合。333、9.在首次筛选访视之前30天(或这样的药剂的5个半衰期)内参与任何其他介入性临床试验、或用任何研究性药物进行治疗、或研究性使用经批准的治疗。334、10.定期使用大麻或大麻产品，包括含有大麻二酚(cannabidiol，cbd)的非处方产品。335、11.过去5年内有药物(包括大麻)或酒精滥用史。336、6.4.5.重新测试337、如果研究者认为在筛选期间实验室异常是暂时的，则可在筛选期间重复一次实验室测试。应记录研究者进行重新测试的理由。如果重新测试的结果不再具有排除性，则参与者可被招募。338、6.4.6.重新筛选339、允许筛选失败的参与者在医学监测者商讨之后重新筛选一次。自先前研究访视过去至少5天之后，可安排重新筛选。340、6.4.7.退出标准341、参与本临床研究可因以下原因中任一者而中止：342、1.参与者因任何原因撤回同意或要求中止研究；343、2.发生使参与者暴露于重大风险和/或不允许参与者遵守方案要求的任何医学病症或情况；344、3.任何sae、临床上显著的不良事件(ae)、严重实验室异常、并发疾病、或指示研究者继续参与不符合参与者的最佳利益的其他医学病症；345、4.妊娠；346、5.禁止伴随药物的要求；347、6.参与者未能遵守方案要求或与研究相关的程序；或者348、7.主办者或监管机构终止研究。349、如果由于上述标准或任何其他原因参与者提前退出研究，则研究人员应尽一切努力来完成为提前终止访视而安排的整组评估。参与者退出的原因必须被记录在电子病例报告表(ecrf)中。350、在参与者失随访的情况下，必须尝试联系参与者至少3次，并记录在参与者的医疗记录中。退出的参与者不会被替换。351、6.4.8.研究治疗352、参与者用奥比塞曲匹10mg/天进行治疗。353、6.4.8.1给药依据354、在先前对健康对象和患者进行的奥比塞曲匹多剂量临床研究中，用5mg奥比塞曲匹剂量观察到接近最大作用。在该剂量水平下，cetp活性和浓度有效降低，并且hdl-c水平提高，而ldl-c水平降低。355、6.4.8.2随机化和盲法356、满足所有资格标准的参与者均被招募到本研究中。所有参与者均用10mg奥比塞曲匹进行治疗。打破盲法不适用，因为这是开放标签研究。357、6.4.8.3药物供应358、6.4.8.3.1制剂和包装359、研究药物由5mg奥比塞曲匹片剂组成。所有产品均按照现行欧盟良好生产实践(european union good manufacturing practice)进行制备。360、奥比塞曲匹片剂为圆形、白色膜包衣片剂、无识别标记、包含5mg的奥比塞曲匹钙药物物质。存在于片剂核芯中的赋形剂是微晶纤维素、甘露糖醇、淀粉乙醇酸钠、胶体二氧化硅和硬脂酸镁。市售膜包衣制剂(opadry ii white,ex colorcon)应用于核芯。361、奥比塞曲匹片剂被包装到箔泡罩中，并组装成泡罩卡。泡罩卡被清楚地标记以指示每天使用哪些泡罩。泡罩卡被组装成药盒，并且每个药盒为必要给药提供了足够的供应。保质期是基于单独产品的稳定性来指定的。药盒应低于25℃储存。362、研究者手册中描述了奥比塞曲匹片剂的物理、化学和药物制剂特性和特征。363、所有研究药物均按照所有适用的当地监管要求进行标记。364、6.4.8.3.2研究药物的制备和分发365、本研究中使用的研究药物为5mg奥比塞曲匹片剂。366、在每次适当的访视时，参与者接受包含具有适合于参与者治疗组的研究药物的泡罩卡的药盒。指示参与者每天从药盒中的泡罩卡中取出2枚片剂。泡罩卡被清楚地标记以指示每天使用哪些泡罩。每个药盒均为1个月的给药提供足够的供应。指示参与者在下次访视时将所有未使用的研究药物退还。367、6.4.8.3.3研究药物施用368、在第1天至第126天，参与者经口且每天一次施用研究药物。研究药物应在每天早上大约同一时间与食物一起施用。在安排访视的当天，研究药物应在所有空腹血液血样之后与食物一起施用。如果参与者忘记在规定日服用研究药物，则他们应按照正常服用下一剂量，并且不应服用双倍剂量以弥补忘记的剂量。369、6.4.8.3.4治疗依从性370、通过计数未使用的片剂和胶囊剂来评价对研究药物方案的依从性。在治疗期期间，如果依从性不在80％至120％(包含端值)之间，则告知参与者关于依从性对方案的重要性。如果在2次连续访视中超出限制，则由研究者和主办者决定参与者是否应退出本研究。371、6.4.8.3.5储存和责任性372、所有研究药物均储存在低于25℃的安全区域中，且仅限研究者和经授权的现场人员进入。373、根据监管要求，研究者或指定的现场人员必须记录向参与者分发和/或施用的研究药物的量、由参与者返还的量、以及从主办者(或代表)接收和返还至主办者(或代表)的量(当适用时)。在整个研究过程中必须保持研究药物的责任性记录。差异将被协调或解决。未使用的研究药物的最终处置程序在适当的研究手册中提供。374、6.4.9.既往和伴随的药物和/或程序375、6.4.9.1排除的药物和/或程序376、在研究期间，禁止除研究性研究药物之外的任何脂质改变治疗。377、6.4.9.2既往和伴随药物使用的记录378、记录在筛选访视之前28天内使用的药物。除研究药物之外施用的任何药物(无论根据方案是否允许)均应记录在伴随药物ecrf上。379、6.4.10.研究程序380、研究程序遵循程序时间表：381、382、apoe e4＝载脂蛋白e-e4；cdr-sb＝临床痴呆评定量表-盒之和；cfc＝认知功能复合(cognitive-functional composite)；ecg＝心电图；eot＝治疗结束(end oftreatment)；et＝提前终止；mmse＝简易精神状态检查；moca＝蒙特利尔认知评估；mri＝磁共振成像。383、6.4.10.1.1临床实验室评价384、如在程序时间表中所示获得用于化学和血液学的血液，并将其送至中心实验室以进行分析。特别地，收集以下脂质谱数据：385、载脂蛋白b386、载脂蛋白e(apoe)387、高密度脂蛋白-apoe[1]388、高密度脂蛋白胆固醇389、低密度脂蛋白胆固醇[2]390、非高密度脂蛋白胆固醇391、甘油三酯392、极低密度脂蛋白胆固醇393、载脂蛋白ai394、载脂蛋白aii395、[注1]有和无载脂蛋白c3。396、[注2]通过制备型超速离心进行测量，也称为β定量。397、如在程序时间表中所示，以下是在csf和/或血浆中收集的ad生物标志物谱数据中：398、tau和ptau表位399、aβ1-42、aβ1-40、aβ1-42/aβ1-40之比400、神经颗粒蛋白401、神经丝轻链402、gfap(glial fibrillary acidic protein，胶质细胞原纤维酸性蛋白)403、ykl40404、pdgfrb。405、用于化学和血液学的血液样品必须在禁食条件下(即，在参与者禁食持续≥10小时之后)获得。出于本研究的目的，禁食被定义为除了水和任何必需药物之外不经口吃任何东西。如果参与者未禁食，则研究者应尽快重新安排访视。估计肾小球滤过率使用慢性肾病流行病学协作方程进行计算。仅在筛选访视时，血液学组包括hbalc、inr、pt和ptt。406、如在程序时间表中所示获得尿，并且将其送至中心实验室以进行全面尿分析。407、仅在筛选访视时在参与本研究之前进行尿妊娠试验。408、6.4.10.1.2心电图409、在筛选访视时由研究者或经培训的现场人员进行单一标准12导联ecg，并集中读取。410、6.4.10.1.3体格检查411、如在上述程序表中所示进行体格检查。412、6.4.11.效力评估413、主要效力终点是在第24周时测得的csf中apoa-i、apoe和胆固醇外排能力的水平相对于基线的变化。414、针对csf和血浆中脂质谱测量的次要效力终点是：415、·在筛选(访视1)或基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时hdl-c的百分比变化。416、·在筛选(访视1)或基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时hdl亚级分的百分比变化。417、·在筛选(访视1)或基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时缺乏apoc3的hdl颗粒中hdl-apoe的百分比变化。418、·在筛选(访视1)或基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时apoa-ii的百分比变化。419、·在基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(访视6)时24s-羟基胆固醇和27-羟基胆固醇的百分比变化。420、针对csf中ad生物标志物的另外的次要效力终点：421、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时tau和ptau表位的百分比变化。422、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时aβ1-42、aβ1-40、aβ1-42/aβ1-40之比的百分比变化。423、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时神经颗粒蛋白的百分比变化。424、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时神经丝轻链的百分比变化。425、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时gfap的百分比变化。426、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时ykl40的百分比变化。427、·在筛选(访视1)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时pdgfrb的百分比变化。428、针对血浆中ad生物标志物的另外的次要效力终点是：429、·在基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时tau和ptau表位的百分比变化。430、·在基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时aβ1-42、aβ1-40、aβ1-42/aβ1-40之比的百分比变化。431、·在基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时神经颗粒蛋白的百分比变化。432、·在基线(访视2)时、在第84天(访视4)时和在治疗结束(第168天，访视6)时神经丝轻链的百分比变化。433、跟踪疾病进展的另外的次要效力终点是：434、·在基线(访视2)时和在治疗结束(第168天，访视6)时实施认知功能复合测试。435、·在筛选(访视1)时和在治疗结束(第168天，访视6)时实施cdr-sb测试。436、·在筛选(访视1)、基线(访视2)、第84天(访视4)和治疗结束(第168天，访视6)时实施简易精神状态检查。437、6.4.12.结果438、到治疗结束时，奥比塞曲匹的施用在患有早期ad和具有至少一个apoe4等位基因的患者中有效提高了无apo-c3的颗粒中总apoe、hdl-apoe、hdl-apoe的血浆水平，以及缺乏apoc3的颗粒中hdl-apoe的百分比。439、与临治疗开始之前的水平相比，到治疗结束时，奥比塞曲匹的施用有效阻止了以下中的至少一者：(i)血浆中aβ42水平进一步降低，(ii)血浆中aβ40水平进一步提高，(iii)血浆中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)血浆中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)血浆中神经颗粒蛋白水平进一步提高。440、与临治疗开始之前的水平相比，奥比塞曲匹的施用有效阻止了以下中的至少一者：(i)csf中aβ42水平进一步降低，(ii)csf中aβ40水平进一步提高，(iii)csf中aβ42/aβ40之比进一步降低，(iv)csf中神经丝轻链(nfl)水平进一步提高，以及(v)csf中神经颗粒蛋白水平进一步提高。441、在招募与治疗结束之间，对象在认知状态方面不经历显著下降。442、7.等同方案和通过引用并入443、虽然已经参照优选实施方案和多个替代实施方案对本发明进行了具体示出和描述，但是本相关领域的技术人员将理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在其中进行形式和细节的多种改变。444、出于所有目的，在本说明书的主体内引用的所有参考文献、已授权专利和专利申请在此通过引用整体并入。技术实现思路当前第1页12当前第1页12